同时敲低六种抑制性膜蛋白增强CAR-T细胞抗胆管癌活性

背景 现有治疗胆管癌的方法疗效不佳。然而，嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞正成为一种潜在的治疗策略。实体瘤在免疫抑制微环境中存在多种不利因素，会损害CAR-T细胞的浸润和功能。本研究旨在通过敲低免疫检查点和免疫抑制性分子受体来改善CAR-T细胞的功能。 方法 我们使用免疫组织化学评估了胆管癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）和B7同源物3蛋白（B7H3）抗原的表达，并通过流式细胞术筛选了胆管癌微环境中的特定免疫检查点。随后，我们工程化了靶向EGFR和B7H3抗原的CAR-T细胞。我们通过构建两组小发夹RNA同时敲低了CAR-T细胞中的免疫检查点和免疫抑制性分子受体，并在体外使用肿瘤细胞系和胆管癌类器官模型，以及在体内使用人源化小鼠模型评估了工程化CAR-T细胞的抗肿瘤活性。 结果 我们观察到胆管癌组织中EGFR和B7H3抗原高表达。EGFR-CAR-T和B7H3-CAR-T细胞表现出特异性的抗肿瘤活性。我们发现在胆管癌微环境中浸润的CD8+ T细胞上存在丰富的程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域蛋白3（Tim-3）以及T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域（Tigit）。随后我们降低了CAR-T细胞表面这3种蛋白的表达，命名为PTG-scFV-CAR-T细胞。此外，我们敲低了PTG-scFV-CAR-T细胞的转化生长因子β受体（TGFβR）、白细胞介素-10受体（IL-10R）和白细胞介素-6受体（IL-6R）的表达。这些细胞命名为PTG-T16R-scFV-CAR-T细胞，在体外能有效杀伤肿瘤细胞，并在胆管癌类器官模型中促进肿瘤细胞凋亡。最后，PTG-T16R-scFv-CAR-T细胞在体内对肿瘤生长表现出更强的抑制作用，并在延长小鼠生存期方面更优。 结论 我们的结果显示，敲低六重抑制性分子的PTG-T16R-scFV-CAR-T细胞在体外和体内均表现出对胆管癌的强大免疫力和长期疗效。该策略为胆管癌提供了一种有效的个性化免疫细胞疗法。