应激诱导的泪腺昼夜节律和神经免疫网络破坏驱动干眼病发病

目的：慢性心理应激是干眼病的重要但定义不清的危险因素。本研究探讨了持续应激如何改变泪腺（LG）的昼夜节律调节，以及神经内分泌信号在应激诱导的干眼病中的作用。方法：雄性C57BL/6J小鼠接受两周的每日束缚应激，伴或不伴β-肾上腺素能阻断或糖皮质激素合成抑制。通过毛果芸香碱刺激的酚红棉线试验评估泪液分泌。每三小时采集一次泪腺，持续24小时，进行批量RNA测序，并使用Jonckheere-Terpstra-Kendall周期（JTK_CYCLE）算法分析节律性。在zeitgeber时间6进行单细胞RNA测序，以绘制应激激素受体在泪腺细胞类型中的表达。组织学、免疫组织化学和血浆激素测定表征结构、免疫、代谢和神经变化。结果：应激减少泪液分泌，改变泪腺形态，并激活交感神经和下丘脑-垂体-肾上腺轴。转录组学分析显示，在免疫、代谢、神经和增殖通路中，节律性基因表达显著丧失，而核心时钟振荡器保持完整，定义为昼夜节律输出解偶联。这与昼夜节律性免疫运输紊乱、神经元活性降低、代谢受损和增殖减少相关。单细胞分析显示，β-肾上腺素能和糖皮质激素受体在上皮、内皮和免疫细胞群中表达。普萘洛尔或美替拉酮部分恢复了节律性转录、腺体结构和泪液分泌。结论：慢性应激诱导泪腺昼夜节律输出解偶联，驱动神经免疫和代谢功能障碍以及干眼病发病机制。β-肾上腺素能和糖皮质激素通路抑制的部分挽救突出了神经内分泌信号作为治疗靶点，并将泪腺确立为应激诱导的昼夜节律紊乱的外周模型。