IL1RAP-CAR修饰的TGFβ1印记自然杀伤细胞联合IL-15激动剂和抗GD2抗体克服尤文肉瘤肿瘤微环境耐药性

背景：转移性/复发性/难治性尤文肉瘤（ES）患者的预后极差。自然杀伤（NK）细胞对ES具有高度细胞毒性，但受到ES肿瘤微环境（TME）内耐药性的限制。本研究旨在通过联合免疫疗法克服ES对NK细胞的耐药性，该方法通过针对新型ES靶点白细胞介素-1受体辅助蛋白（IL1RAP）的嵌合抗原受体（CAR）实现NK细胞的肿瘤特异性靶向，通过TGFβ1印记规避转化生长因子β（TGFβ）介导的NK细胞免疫抑制，通过抗GD2抗体迪努妥昔单抗（dinutuximab）增强NK细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC），并通过IL-15激动剂NKTR-255改善NK细胞的持久性和ADCC。 方法：使用共表达IL-21和4-1BBL的抗原呈递饲养细胞将外周血单个核细胞扩增为NK细胞和TGFβ1印记的NK（imNK）细胞。通过电穿孔将抗IL1RAP-CAR信使RNA导入NK或imNK细胞。进行体外细胞毒性试验，研究抗IL1RAP-CAR-NK/imNK细胞单独或联合NKTR-255和/或迪努妥昔单抗对ES细胞的疗效。使用ES异种移植小鼠模型研究联合CAR-NK/imNK细胞疗法在体内对ES的抗肿瘤疗效。对来自异种移植瘤的细胞进行单细胞RNA测序和质谱流式细胞分析，以确定对该联合免疫疗法的反应/耐药机制。 结果：我们发现抗IL1RAP-CAR-NK细胞在体外显著且特异性地增强了对IL1RAP+ES的NK细胞毒性，并在体内减少了肿瘤生长和肺转移。TGFβ1印记显著增强了CAR-NK细胞的体外细胞毒性和肿瘤浸润，导致在ES原位小鼠模型中肿瘤生长显著减少并改善了动物存活率。与单药或双药联合相比，印记的CAR-NK（CAR-imNK）细胞、NKTR-255与迪努妥昔单抗的三联组合对IL1RAP+GD2+ ES具有更优越的抗肿瘤疗效。对异种移植瘤单细胞的机制研究表明，CAR-imNK+NKTR-255+迪努妥昔单抗疗法导致ES细胞凋亡增加、ES细胞上NK抑制受体配体表达上调，以及ES TME中小鼠巨噬细胞迁移增强。 结论：我们的临床前数据表明，利用靶向肿瘤的TGFβ1印记IL1RAP-CAR-NK细胞，结合IL-15激动剂和抗GD2抗体的联合先天免疫疗法，是针对转移性/复发性/难治性ES的一种有前景的新型治疗策略。