测量免疫细胞表面CD200R和CD200表达
比较SLE患者与健康对照及其他系统性自身免疫病患者之间CD200R和CD200的表达差异
通过流式细胞术检测外周血中T细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞等免疫细胞亚群上的CD200R和CD200膜表达
Increased soluble CD200 in serum of SLE patients does not reflect disease activity or affect CD200R1 function in T cells
研究包含横断面和前瞻性队列分析、体外T细胞功能实验(CD200-Fc、CD200-CHO、OX108刺激)及可溶性CD200干扰实验,并进行了机制探索(IFN影响),证据层级多样且含功能验证。
SLE患者外周血T细胞 SLE患者血清和尿样本 健康对照外周血T细胞 CHO细胞系(表达CD200)
SLE患者和对照的T细胞CD200R膜表达差异(流式细胞术) CD200R交联方式(CD200-Fc、OX108、CHO-CD200)对T细胞细胞因子产生的影响 sCD200和sCD200R在血清和尿液中的浓度及与临床指标(如SLEDAI、补体、抗dsDNA)的相关性 外源IFNα(100 IU/ml)对CD200R抑制功能的影响
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
比较SLE患者与健康对照及其他系统性自身免疫病患者之间CD200R和CD200的表达差异
通过流式细胞术检测外周血中T细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞等免疫细胞亚群上的CD200R和CD200膜表达
评估SLE患者血清和尿液中可溶性CD200和CD200R浓度与疾病活动度及临床指标的相关性
使用ELISA测量血清sCD200和sCD200R浓度,并在PROFILE队列中测尿液sCD200;将浓度与SLEDAI、补体、抗dsDNA等指标进行相关性分析
验证CD200R在T细胞上的抑制功能,并评估sCD200是否干扰该功能
从健康对照或SLE患者分离T细胞,用抗CD3/CD28或PHA刺激,通过CD200-Fc、OX108、CHO-CD200细胞或可溶性CD200his进行CD200R交联,检测产生细胞因子(IFN-γ、IL-2等)的能力
探究在I型IFN条件下CD200R在T细胞上的功能是否发生改变
在存在外源IFNα(100 IU/ml)的情况下,用CD200-CHO细胞交联CD200R,检测T细胞细胞因子产生
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 流式细胞术 | LSR Fortessa | BD | -- |
| FlowJo软件 | FlowJo | -- | |
| 细胞培养 | DMEM/F12培养基 | Gibco™ | 31331028 |
| T细胞分离 | Ficoll-Paque™ PLUS分离液 | Cytiva | -- |
| 人全T细胞分选试剂盒 | Miltenyi | 130-096-535 | |
| 细胞培养 | X-VIVO™培养基 | Lonza | BE02-060F |
| CD200R交联 | OX108抗体 | Ebioscience | 16-9201-85 |
| CD200-Fc融合蛋白 | Boehringer Ingelheim | -- | |
| CD200R-Fc融合蛋白 | Boehringer Ingelheim | -- | |
| 细胞刺激 | 抗CD3/CD28 T细胞活化磁珠 | Invitrogen | 10587973 |
| PHA刺激 | 植物血凝素-L | Roche | 11249738001 |
| 细胞因子刺激 | 白细胞介素-2 | Novartis | 13610880 |
| 白细胞介素-4 | RnD systems | 204-IL | |
| IFN刺激 | 干扰素α 2a | Cell Sciences | CRH063A |
| 可溶性CD200干扰 | 重组人CD200蛋白His标签 | BioConnect | 10,886-H08H |
| mRNA提取 | RNeasy Mini试剂盒 | Qiagen | 74106 |
| cDNA合成 | iScript™逆转录预混液 | Bio-Rad | 1708891 |
| qPCR | QuantStudio™ 12K Flex实时荧光定量PCR系统 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| SYBR™ Select预混液 | Fisher Scientific | 13266519 | |
| ELISA | CD200R1 ELISA试剂盒 | Abcam | ab272196 |
| 抗CD200单克隆抗体 | Sino Biological | 10886-R005 | |
| 抗CD200多克隆抗体 | Bio-Techne | AF2724 | |
| 细胞活性染色 | 可固定eF780偶联活力染料 | eBioscience | 65-0865-14 |
| 流式细胞术 | Brilliant染色缓冲液 | BD | 563794 |
| 固定破膜 | Cytofix/Cytoperm™固定透化试剂盒 | BD | 554722 |
| 细胞培养 | Nunc免疫Maxisorp 96孔板 | Thermo Scientific™ | 442404 |
| 96孔圆底板 | Thermo Scientific™ | 163,320 | |
| 培养基添加剂 | 青霉素-链霉素 | Sigma-Aldrich | P0781 |
| 培养基 | HEPES | Gibco™ | 15630056 |
| 血清替代物 | Panexin血清替代物 | PAN Biotech | P04-96950 |
| 红细胞裂解 | 氯化铵-碳酸氢钾裂解液 | -- | -- |
| 细胞保存 | 二甲基亚砜 | Sigma-Aldrich | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 流式细胞术分析CD200R/CD200表达 | 抗体克隆号、荧光标记、染色条件(抗体浓度、孵育时间) 阅读提示:Methods: Flow cytometry; 补充表1-4 |
| CD200R交联实验 | CD200-Fc或OX108浓度,刺激方式(抗CD3/CD28磁珠比例),孵育时间 阅读提示:Methods: CD200R ligation with CD200-Fc; CD200R ligation with CD200-CHO cells |
| 可溶性CD200干扰实验 | sCD200浓度(2000 pg/ml),CD200R-Fc对照浓度 阅读提示:Methods: CD200R ligation with CD200-Fc, 可溶性CD200部分 |
| sCD200和sCD200R ELISA测量 | ELISA试剂盒(自制或商品化)、标准曲线范围 阅读提示:Methods: sCD200 and sCD200R ELISA |