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SLIT3：通过Akt/GSK3β/β-catenin信号通路调控成牙本质分化的新型调节因子
SLIT3: a novel regulator of odontogenic differentiation through Akt/GSK3β/β-catenin signaling pathway
摘要
根尖乳头干细胞(SCAP)的牙源性分化受多种细胞外基质蛋白调控，这些蛋白在牙本质形成与再生中发挥关键作用。细胞外基质蛋白SLIT3作为一种经典的轴突导向分子，已被证实是连接骨吸收与形成的骨因子。然而，其在牙发育过程中的作用尚未充分阐明。因此，本研究旨在探索SLIT3对SCAP增殖与分化的影响及作用机制。通过对发育期小鼠磨牙的分析发现，虽然Slit3 mRNA仅表达于牙间充质，但SLIT3蛋白在成牙本质细胞及邻近上皮性成釉细胞中均有显著检测。实时聚合酶链反应(RT-PCR)与蛋白质印迹实验证实，在SCAP牙源性分化过程中SLIT3表达量上升。研究采用SLIT3 siRNA敲降和重组人SLIT3(rhSLIT3)蛋白处理SCAP，细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测显示SLIT3促进SCAP增殖，碱性磷酸酶(ALP)与茜素红染色显示矿化作用增强，牙源性标志物DMP-1与DSPP亦发生相应调节。此外，rhSLIT3处理提升了SCAP中p-Akt与p-GSK3β水平，促进β-连环蛋白核转位。使用Akt/GSK3β/β-连环蛋白信号通路抑制剂可消除SLIT3的作用效应。综合而言，本研究数据表明SLIT3通过激活Akt/GSK3β/β-连环蛋白信号通路促进SCAP增殖与牙源性分化。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| R包Seurat (版本 4.0.5) | -- | -- |
| ‘MAST’包 (版本 1.20.0) | -- | -- |
| DAB显色试剂盒 | Zhongshan Golden Bridge Biotechnology | -- |
| I型胶原酶 | Sigma-Aldrich | -- |
| 分散酶II | Sigma-Aldrich | -- |
| α-MEM培养基 | Gibco | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- |
| Lipofectamine 2000转染试剂 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Cell Counting Kit-8试剂盒 | Dojindo | -- |
| CIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 | Beyotime | -- |
| 茜素红S | Solarbio | -- |
| TRIzol试剂 | TAKARA | -- |
| Nanodrop分光光度计 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| PrimeScript RT试剂盒 | TAKARA | -- |
| Roche 480 Light Cycler | Roche | 480 |
| SYBR Green预混液 | Yeason | -- |
| 总蛋白提取试剂盒 | SAB | -- |
| BCA蛋白浓度测定试剂 | Beyotime | -- |
| 核蛋白提取试剂盒 | Beyotime | -- |
| TOPFlash荧光素酶报告质粒 | Beyotime | -- |
| 荧光显微镜 | Leica | -- |
| SPSS 24.0软件 | SPSS Inc. | 24.0 |