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T细胞促进角质形成细胞和真皮成纤维细胞中皮肤炎症性疾病的特异性转录程序
T Cells Promote Distinct Transcriptional Programs of Cutaneous Inflammatory Disease in Keratinocytes and Dermal Fibroblasts
摘要
T细胞与结构细胞共同协调损伤后适宜的炎症反应及屏障完整性的恢复。功能异常的T细胞会引发皮肤病理变化，并伴随结构细胞频率及转录状态的改变，但不同T细胞亚群在多大程度上驱动疾病相关变化仍不明确。本研究发现，功能多样化的循环性与皮肤驻留性CD4+CLA+ T细胞群体能在人角质形成细胞和成纤维细胞中诱导与炎症组织或健康组织相关的差异性转录结果。我们鉴定了角质形成细胞中由辅助性T细胞17诱导的基因集，这些基因在银屑病患者皮肤中富集，并可通过抗IL-17疗法恢复正常表达。同时，我们报道了由CD103+皮肤驻留T细胞诱导的转录模块，该模块在健康对照组中富集，而在银屑病和硬皮病中表达减弱；研究进一步显示疾病状态下CD103+ T细胞频率发生改变。通过免疫依赖性转录特征分析临床数据，能够界定区分炎症皮肤与健康皮肤的T细胞亚群及关键基因，并为探究患者对生物制剂治疗的异质性反应提供研究路径。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| Ficoll-Hypaque密度梯度介质 | GE-Healthcare | GE17–1440-02 |
| CD4微珠 | Miltenyi | 130–045-101 |
| ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基 | StemCell | 10981 |
| 青霉素/链霉素 | Sigma-Aldrich | P0781 |
| 15平方厘米培养皿 | -- | -- |
| 普利霉素 | Invitrogen | ant-pm-1 |
| 活检工具 | Integra™ Miltex™ | -- |
| IV型胶原酶 | Worthington | LS004186 |
| 脱氧核糖核酸酶 | Sigma-Aldrich | DN25 |
| RPMI培养基 | -- | -- |
| 人血清 | Sigma-Aldrich | H4522, lot SLC0690 |
| 6孔非组织培养处理培养皿 | -- | -- |
| 100微米滤膜 | -- | -- |
| BD LSR™ Fortessa细胞分析仪 | BD | -- |
| BD FACSAria™ Fusion流式细胞分选仪 | BD | -- |
| 人全T细胞分离试剂盒 | Miltenyi | 130–096-535 |
| 顺铂 | Enzo Life Sciences | ALX-400–040 |
| Maxpar®细胞染色缓冲液 | Standard BioTools | 201068 |
| Maxpar Intercalator-Ir完整细胞核染料 | Fluidigm | 201192A |
| 固定和破膜缓冲液 | Fluidigm | 201067 |
| EQ四元素校准微球 | Standard BioTools | 201078 |
| Standard BioTools CyTOF Helios质谱流式细胞仪 | Standard BioTools | -- |
| ImmunoCult™人源αCD3/αCD28/αCD2 T细胞活化试剂 | StemCell | 10970 |
| LEGENDplex™试剂 | BioLegend | -- |
| KGM™角质形成细胞生长培养基BulletKit™ | Lonza | CC-3111 |
| DMEM培养基 | Gibco™ | 10938025 |
| 96孔平底板 | -- | -- |
| TRIzol™试剂 | Invitrogen™ | 15596026 |
| SMART-Seq v4超低起始量RNA测序试剂盒 | Takara | -- |
| NexteraXT DNA样品制备试剂盒 | Illumina | -- |
| HiSeq2500测序仪 | Illumina | -- |