向绵羊黄体输注干扰素-tau延迟黄体溶解

Interferon-tau infusion into the ovine corpus luteum delays luteolysis†

作者信息Aydin Guzeloglu, Jeanette V Bishop, Hana Van Campen, Michele R Plewes, Carolina L Gonzalez-Berrios, Jessica N Kincade, John S Davis, Thomas R Hansen
PMID38869890
发布时间2024-09-14
DOI10.1093/biolre/ioae084

摘要

胚胎来源的干扰素-τ(IFNT)通过旁分泌作用于子宫内膜和内分泌作用于黄体(CL),启动母羊的妊娠识别。为研究IFNT对黄体的影响而不诱导子宫内膜中的干扰素刺激基因(ISGs),在发情周期第9至12天通过渗透泵以10、50或100纳克/小时速率直接将重组绵羊IFNT(roIFNT)或牛血清白蛋白递送至黄体。第12天采集子宫内膜和黄体样本。50纳克/小时的roIFNT在第12天诱导黄体中ISG15表达,但不影响子宫内膜ISG15浓度。在第二项实验中,于发情周期第10至17天向黄体灌注roIFNT(50纳克/小时),每日采集血清样本。与对照组相比,roIFNT灌注母羊在第15至17天的血清孕酮浓度显著升高。roIFNT灌注组的黄体中LHCGR、STAR、CYP11A1、HSL、OPA1及蛋白激酶A的mRNA和蛋白水平均高于对照组。roIFNT灌注母羊黄体中ISG15和MX1 mRNA水平升高,但子宫内膜中未见增加。对照组子宫内膜ESR1 mRNA和蛋白浓度高于roIFNT灌注组。综上所述,黄体内递送roIFNT可诱导ISGs表达,稳定黄体类固醇生成,延缓黄体溶解,且不诱导子宫内膜干扰素刺激基因。在roIFNT灌注母羊的子宫内膜中观察到ESR1受抑制,表明直接向黄体递送IFNT对子宫内膜具有额外的抗黄体溶解作用。

实验方法

产品清单

名称品牌货号
气体麻醉机Landmark Veterinary Anesthesia Systems--
渗透泵Durect Corporation2001
导管Durect Corporation7710
TRIzol试剂Ambion15596016
无RNase DNA酶IQiagen79254
纯化试剂盒Qiagen74204
Nanodrop分光光度计Thermo Scientific--
iScript逆转录预混液Bio-Rad1708841
0.2毫升八联管LifeScience ProductsLS-9508-D
384孔板BioRadHSP3805
IQ SYBR Green预混液Bio-Rad1706882
CFX 384实时荧光定量系统Bio-Rad--
RIPA裂解缓冲液----
Halt蛋白酶和磷酸酶单次使用抑制剂鸡尾酒Thermo Scientific78442
Pierce BCA蛋白定量试剂盒Thermo Scientific23225
0.2微米硝酸纤维素膜Amersham Protran10600001
脱脂奶粉BioRad1706404
Clarity Western ECL底物试剂盒BioRad1705061
ChemiDoc XRS+化学发光成像系统与Image Lab软件BioRad--
磷酸盐缓冲液CytivaSH30258
多聚赖氨酸包被载玻片Cancer DiagnosticsAMS45-01
抗原修复液VectorLabsH-3300
抗小鼠ABC HRP试剂盒VectorLabsPK-6102