LncRNA NEAT1招募SFPQ调控MITF剪接并控制RPE细胞增殖

目的 视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖受到精确调控以维持视网膜稳态。小眼畸形相关转录因子（MITF）是RPE细胞中的一个关键转录因子，具有两种选择性剪接异构体：（+）MITF和（−）MITF。先前的工作表明，（−）MITF而非（+）MITF抑制RPE细胞增殖。本研究旨在探讨长链非编码RNA（lncRNA）核富集丰富转录本1（NEAT1）在调控MITF剪接及由此调控RPE细胞增殖中的作用。 方法 使用小鼠RPE、原代培养的小鼠RPE细胞以及不同增殖状态的人胚胎干细胞（hESC）来源的RPE细胞，通过逆转录PCR（RT-PCR）或定量RT-PCR评估（+）MITF、（−）MITF和NEAT1的表达。使用特异性小干扰RNA（siRNA）敲低NEAT1。使用慢病毒感染过表达剪接因子脯氨酸和谷氨酰胺丰富蛋白（SFPQ）。通过细胞计数和Ki67免疫染色分析细胞增殖。使用RNA免疫沉淀（RIP）分析SFPQ与MITF或NEAT1之间的结合。 结果 NEAT1在增殖性RPE细胞中高表达，这些细胞中（−）MITF的表达较低。在RPE细胞中敲低NEAT1将MITF剪接模式转变为产生更高水平的（−）MITF并抑制细胞增殖。机制上，NEAT1招募SFPQ直接结合MITF mRNA以调控其选择性剪接。在ARPE-19细胞中过表达SFPQ增强了SFPQ与MITF的结合富集，并增加了（+）MITF的剪接效率。NEAT1敲低后，SFPQ与MITF的结合亲和力降低。 结论 NEAT1作为支架招募SFPQ到MITF mRNA并促进其结合亲和力，这在调控MITF的选择性剪接和RPE细胞增殖中发挥重要作用。