支架理化性能表征
评估支架的微观结构和物理性能。
通过SEM观察支架的表面形貌和孔隙结构。
Comparative study of bladder augmentation using different biomimetic scaffolds: electrospun nanofiber vs. extracellular matrix scaffold with adipose-derived stem cells
研究涵盖体外细胞实验(细胞粘附、增殖、表型)、体内皮下植入组织相容性实验以及兔膀胱扩大模型的功能和组织学评价,包含多层级验证。
兔膀胱扩大模型 兔脂肪间充质干细胞(ASCs) 兔膀胱上皮细胞
ASCs接种密度:0.15×10^6 cells/mL 体内实验分组及样本量:无ASC组(SIS、PLLA、PLLA/Gelatin各n=10,6周和12周各5只);ASC组(ASCs-SIS、ASCs-PLLA、ASCs-PLLA/Gelatin各n=5) 膀胱缺损大小:3 cm × 3 cm 观察时间点:6周和12周 统计方法:Student's t-test 或 ANOVA,P<0.05
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估支架的微观结构和物理性能。
通过SEM观察支架的表面形貌和孔隙结构。
确定最佳细胞接种密度,评估支架的细胞相容性。
将兔ASCs以不同密度接种于支架培养,通过CCK-8法检测细胞粘附和增殖。
评价支架对细胞粘附和增殖的影响。
将0.15×10^6 cells/mL ASCs接种于包裹或未包裹FBN的支架,通过CCK-8检测细胞粘附率及连续培养至14天的增殖。
评估支架培养14天后ASCs表型维持。
通过流式细胞术检测CD44-PE、CD90-PB450、CD105-Violet605的表达。
观察ASCs在支架上的形态和分布。
通过SEM和荧光显微镜观察细胞骨架和核,用DiI标记细胞。
评估低氧条件下ASCs分泌细胞因子的水平。
用ELISA检测缺氧预处理的ASCs培养上清中VEGF、HGF、IL-10的浓度。
评估ASCs对膀胱上皮细胞迁移的影响。
通过划痕实验,将ASCs培养基上清加入膀胱上皮细胞,观察迁移。
评估植入物在体内的组织相容性和降解情况。
将无细胞和有细胞的支架皮下植入兔子背部,6周后进行组织学评估。
评估不同支架在膀胱扩大模型中的效果。
对兔进行膀胱部分切除,植入支架,随后进行膀胱造影和尿动力学检查。
评估重建膀胱的形态和功能。
在术后6周和12周进行膀胱造影和尿动力学检查,测定膀胱容量、顺应性。
评估重建膀胱的再生情况。
采集膀胱组织,进行H&E、Masson染色和免疫荧光检测。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 支架材料 | 小肠黏膜下层 | Cook Biotech | -- |
| PLLA纳米纤维支架 | Medprin Biotech GmbH | -- | |
| PLLA/明胶纳米纤维支架 | Medprin Biotech GmbH | -- | |
| 细胞培养 | 兔脂肪间充质干细胞 | Procell Life Science & Technology Co. Ltd. | -- |
| 兔脂肪间充质干细胞培养基 | Cyagen Biosciences | -- | |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 兔膀胱上皮细胞 | Procell Life Science & Technology Co. Ltd. | -- | |
| F12K培养基 | Servicebio | -- | |
| 支架处理 | 磷酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 纤连蛋白 | Sciencell | -- | |
| 细胞检测 | 细胞计数试剂盒-8 | Yeasen | -- |
| 酶标仪 | Thermo Fisher | -- | |
| 流式分析 | CD44-PE抗体 | Biolegend | -- |
| CD90-PB450抗体 | Biolegend | -- | |
| CD105-Violet605抗体 | Biolegend | -- | |
| CytoFLEX流式细胞仪 | Beckman Coulter | -- | |
| 细胞形态检测 | 异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽 | Servicebio | -- |
| 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 | Servicebio | -- | |
| CM-DiI细胞膜荧光探针 | Servicebio | -- | |
| IVIS Lumina II活体成像系统 | -- | -- | |
| 细胞因子检测 | VEGF ELISA试剂盒 | CLOUD-CLONE CORP | -- |
| HGF ELISA试剂盒 | CLOUD-CLONE CORP | -- | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | CLOUD-CLONE CORP | -- | |
| 细胞培养 | 低氧培养箱 | Thermo Scientific | -- |
| 细胞迁移实验 | 倒置相差显微镜 | -- | -- |
| SEM | 扫描电子显微镜(Gemini300) | Zeiss | -- |
| 动物实验 | 青霉素 | Harbin Pharmaceutical Group Holding Co., Ltd. | -- |
| 膀胱造影 | 碘帕醇 | Aladdin | -- |
| 尿动力学 | 尿动力学系统(MP 150) | Biopac | -- |
| 组织学评估 | Masson三色染色 | -- | -- |
| 免疫荧光 | 广谱细胞角蛋白抗体(AE1/AE3) | Abcam | ab9377 |
| α-平滑肌肌动蛋白抗体 | Proteintech | 14395-1-AP | |
| CD31抗体 | Abcam | ab199012 | |
| 统计与数据分析 | Image-Pro Plus 6.0 | Media Cybernetics | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | ASCs培养条件:培养基(Cyagen培养基含10% FBS)、传代代数(P3-P4)、培养环境(37°C, 5% CO2)、细胞接种密度(0.15×10^6 cells/mL) 阅读提示:Methods: Cell cultures |
| 支架处理 | 支架浸泡条件(PBS, 37°C, 24 h)、FBN涂层浓度(1 μg/cm^2) 阅读提示:Methods: Scaffold treatment |
| 动物模型 | 动物品系、性别、体重(新西兰兔,雄性,2.0±0.3 kg)、分组及样本量(sham n=5, 实验组 n=10或5)、麻醉剂量(α-chloralose 80 mg/kg)、膀胱缺损大小(3 cm × 3 cm)、支架尺寸(3 cm × 3 cm)、细胞悬液体积和密度(2 ml, 0.15×10^6 cells/mL) 阅读提示:Methods: Bladder augmentation model |
| 膀胱功能评估 | 造影剂种类及浓度(碘帕醇0.3 g/mL)、灌注速率(6 mL/min)、尿动力学系统(MP 150) 阅读提示:Methods: Cystography and urodynamic examination |
| 组织学评估 | 固定液(10%福尔马林)、切片厚度(3-5 μm)、染色方法(H/E, Masson)、免疫荧光抗体及稀释度(AE1/AE3, α-SMA, CD31)、定量软件(Image-Pro Plus 6.0) 阅读提示:Methods: Histologic and immunofluorescence (IF) assessment |