一叶知秋 | HT29细胞基因编辑全攻略！

 

 

1. 细胞背景

HT29细胞是一种源自人类结肠腺癌的细胞系，由J. Fogh于1964年使用外植体培养法从原发肿瘤中分离出来。作为结直肠癌研究的黄金标准模型之一，HT29细胞保留了结肠癌细胞的关键特征，包括上皮形态、糖代谢异常和药物耐药性。该细胞系广泛应用于抗癌药物筛选、肿瘤生物学研究和转移机制探索等领域。

2. 细胞描述

物种：人

组织来源：结肠腺癌（44岁女性患者）

细胞形态：贴壁生长，上皮样，多角形

细胞倍增时间：~48-72小时

培养条件

 完全培养基：McCoy's 5A + 10% FBS + 1% P/S

 培养环境：37℃、5% CO₂

 传代比例：1:3~1:6

 传代频次：3~5天传代一次

消化条件

HT29细胞贴壁牢固，需特别注意：使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化5-7分钟消化时置于37℃培养箱效果更佳，终止消化后需轻柔吹打，完全消化后细胞应呈单细胞悬液。

细胞形态照片

 

图1 HT29细胞ATCC参考正常形态图

细胞特点

HT29细胞是人结直肠腺癌细胞系，来源于结肠癌组织，具有典型的上皮样癌细胞特征。在显微镜下观察，HT29细胞贴壁生长，呈多边形或铺路石样（典型上皮样排列），但比正常结肠上皮细胞更不规则。高密度时可能出现梭形或纤维状细胞（与EMT转化相关）。直径约15-25μm，但异型性明显、大小不一。细胞核大且不规则，核质比（N/C ratio）高，符合癌细胞特征。可见核仁明显，部分细胞呈多核。

 

刚接种时HT29细胞呈圆形，随后迅速贴壁并伸展为多边形上皮样，边界清晰。对数生长期（24-72小时）细胞排列紧密，形成岛状或漩涡状结构，部分细胞可能轻微重叠，但通常保持单层生长。高密度期（>72小时）细胞堆积成多层簇状，中心区域可能因营养限制而坏死。少量细胞脱落悬浮（需与凋亡细胞区分，可通过台盼蓝染色验证）。不同时期的细胞形态如下图：

 

3. 常见问题

3.1 消化困难

解决方案：

（1）消化前用PBS充分洗涤（去除血清影响）；

（2）采用"预温胰酶"法（37℃预热胰酶）；

（3）可尝试胶原酶IV（1mg/mL）辅助消化。

3.2 生长速度不均

优化方案：

（1）保持接种密度＞1×10^5 cells/cm²；

（2）每2天更换新鲜培养基。

通过系统化的培养规范和严格的质量控制，HT29细胞可稳定维持其肿瘤生物学特性，为结直肠癌研究提供可靠的在体外表模型。建议实验前进行3代以上的适应性培养，并定期进行STR鉴定以确保细胞纯度。

4. 基因敲除案例

HT29细胞作为肠癌研究的"黄金标准"，其基因编辑技术的突破将极大推动肿瘤机制研究和药物开发。粒曼生物积累了大量的HT29敲除细胞系，助力肠癌研究。

序号	项目类型	细胞名称	基因名称	实验方法	单克隆阳性率
1	基因敲除	HT29	CHRNA7	RNP	100%
2	基因敲除	HT29	APE1	RNP	100%
3	基因敲除	HT29	VNN1	RNP	100%
4	基因敲除	HT29	TMEM151A	RNP	100%
5	基因敲除	HT29	MET	RNP	100%

 

参考文献

[1] Ngamkham J, Siritutsoontorn S, Saisomboon S, Vaeteewoottacharn K, Jitrapakdee S. CRISPR Cas9-mediated ablation of pyruvate carboxylase gene in colon cancer cell line HT-29 inhibits growth and migration, induces apoptosis and increases sensitivity to 5-fluorouracil and glutaminase inhibitor.Front Oncol. 2022 Nov 10;12:966089. doi: 10.3389/fonc.2022.966089. PMID: 36439442; PMCID: PMC9684343.