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膜蛋白的纯化过程中面临着不稳定、丰度低、难纯化等问题，无法得到高质量和纯度好的膜蛋白开展体外分子互作实验。在细胞中表达GFP/YFP-目标蛋白融合蛋白，利用细胞裂解上清液进行MST检测，解决难以重组表达纯化的蛋白不能做体外分子互作的难题。

研究蛋白与蛋白的相互作用常见的技术包括BiFC、FRET、BRET、Co-IP、Pull-down、酵母双杂交等，然而这些技术主要存在无法定量分析结合的强度及假阳性等问题。利用微量热泳动技术(MST)技术，可以定量分析蛋白质与蛋白结合亲和力。

在细胞中表达GFP/YFP-目标蛋白融合蛋白，将细胞裂解并离心后取上清液。直接利用细胞裂解上清液直接进行微量热泳动 (MST) 检测，解决难以重组表达纯化的蛋白不能做体外分子互作的难题。

通过农杆菌或者转基因植物表达目标蛋白与GFP（YFP）的融合蛋白，提取侵染后烟草叶片或转基因植物的总蛋白进行MST实验，可以解决MST实验中植物蛋白难以纯化的问题。

利用分子对接和动力学模拟预测药物与靶点蛋白的结合模式，确定关键氨基酸位点。通过突变这些氨基酸并进行微量热泳动实验，比较突变型和野生型蛋白与药物的亲和力。如果突变导致蛋白与药物亲和力降低或不结合，则该位点是药物与蛋白的关键结合位点。

研究多个分子间竞争性结合是药物研发和信号通路的常用实验手段，如何检测多个分子间的竞争性结合呢？采用微量热泳动 (MST) 技术可以解决多个分子间的竞争性结合难题。本文分享两个采用微量热泳动 (MST) 技术测定多个分子间的竞争性结合分析案例。

如何研究蛋白与核酸分子互作呢？如何定量分析蛋白与核酸 (DNA/RNA)的亲和力呢？通过对蛋白进行荧光标记或者采用荧光标记的核酸进行 MST 实验，可以解决蛋白与核酸或者核酸与核酸等亲和力检测难题。

MST(MicroScale Thermophoresis)微量热泳动可以定量分析分子间相互作用。实验时对互作分子中的一个分子进行荧光标记，使之成为非常灵敏的标签分子，在MST技术中称之为Target;与之互作的另一个分子称之为Ligand。Target分子与ligand分子结合形成复合物，复合物分子的尺寸、水化层和电荷的改变都可以导致复合物分子的热泳动速度相对于Target分子热泳动速度发生改变，因此很容易检测到到由Target与Ligand分子的结合引起的 MST信号变化。

MST 免纯分子互作技术，无需纯化目的蛋白，采取融合荧光蛋白的荧光标记策略，构建并表达融合荧光蛋白标签（如GFP）的目的蛋白，利用细胞裂解液直接检测分子间的相互作用。本文介绍了MST免纯化技术并分享了两个案例。

微量热泳动（MicroScale Thermophoresis，MST）是一种定量分析生物分子间相互作用的前沿技术。通过精确检测荧光变化，结合灵敏的热泳动现象，MST 提供了一种灵活、强大和快速测量分子间相互作用的方法。佰莱博生物具备5年的微量热泳动分子互作检测经验，积累了丰富的复杂样品MST实验经验。

进行蛋白与小分子亲和力检测时，采用表面等离子共振技术等基于分子间结合引起的质量变化原理进行亲和力检测时，可能会遇到样品分子量低（分子量低于200）或与目标蛋白分子量差异大（与蛋白分子量差异大于100倍）导致检测信号低，以及蛋白难以达到理论上所需的固定量等实验难优化的问题。微量热泳动技术（MST）基于小分子与蛋白结合导致的分子构象、大小、电荷、水化层的变化进行亲和力检测。MST技术对检测的小分子的分子量下限没有限制，即便是离子与蛋白的互作也能轻松检测，同时也不受蛋白与小分子的分子量比值的限制，可以轻松检测蛋白与小分子及离子的相互作用。MST技术无需将蛋白固定在固相载体上，可以更好的保持蛋白的天然构象，利于进行蛋白分子互作实验。

在进行蛋白与小分子亲和力检测时，采用表面等离子共振技术等基于分子间结合引起的质量变化原理进行亲和力检测时，可能会遇到样品分子量低（分子量低于200）或与目标蛋白分子量差异大（与蛋白分子量差异大于100倍）导致检测信号低，以及蛋白难以达到理论上所需的固定量等实验难优化的问题。微量热泳动技术（MST）基于小分子与蛋白结合导致的分子构象、大小、电荷、水化层的变化进行亲和力检测。MST技术对检测的小分子的分子量下限没有限制，即便是离子与蛋白的互作也能轻松检测，同时也不受蛋白与小分子的分子量比值的限制，可以轻松检测蛋白与小分子及离子的相互作用。MST技术无需将蛋白固定在固相载体上，可以更好的保持蛋白的天然构象，利于进行膜蛋白分子互作实验。

本文主要介绍了ITC技术在生物分子相互作用研究中的应用。ITC通过测量生物分子结合过程中的释放或吸收的热量，确定结合常数（KD）、反应化学量（n）、焓（∆H）和熵（ΔS）。文章通过三个高分文章案例展示了ITC技术在蛋白－蛋白、小分子药物-蛋白互作中的应用。