RocketCell™ 3D NSC Complete Growth Kit, AOF 无动物源 3D 神经干细胞完全培养试剂盒应用案例

3D：案例 1

使用 VitroGel® NEURON 进行单细胞包埋的 3D 神经干细胞培养

图1. VitroGel® NEURON 中以单细胞悬液形式进行 NSC 3D 包埋培养

VitroGel® NEURON 水凝胶与 RocketCell™ NSC 培养基均为无动物源（AOF，Animal Origin-Free），可支持 3D 神经干细胞（NSC）培养及神经突起生长。

（A） 通过使用 RocketCell™ NSC 生长培养基（AOF）制备 NSC 单细胞悬液，并与 VitroGel® NEURON 混合，建立 3D NSC 培养体系，培养 6 天。

（B） 通过免疫荧光染色检测 β-III-tubulin 的表达，以评估神经元成熟情况。图像采用 Keyence BZ-X 显微镜拍摄，放大倍数为 10× 和 20×。

 

3D：案例 2

分化后 NSC 球体的 3D 表征

图2. RocketCell™ NSC 完全培养试剂盒（AOF）支持 NSC 球体扩增，并可使用 RocketCell™ NSC-Neuron 神经元分化试剂盒进行分化。

iPSC 采用 RocketCell™ 3D iPSC 完全培养试剂盒（AOF）进行 3D 培养，并分化形成底板神经上皮球体（Floor Plate Neuro-Epithelial Spheroids）。随后使用 VitroGel® 类器官回收液（Organoid Recovery Solution）从水凝胶中回收球体，并使用 RocketCell™ NSC 完全培养试剂盒（AOF）进行 3D 培养，以促进 NSC 球体的扩增。

随后，使用 RocketCell™ NSC-Neuron 神经元分化生长培养基将细胞进一步诱导分化为神经元。

样品经固定和染色后，检测以下标志物的表达：

• （A）微管相关蛋白 2（MAP2，绿色）

• （B）神经丝蛋白-H（Neurofilament-H，红色）

• （C）突触素（Synaptophysin，紫色）

细胞核采用 Hoechst 染料进行染色。

 

3D：案例 3

NSC 球体的 3D 多巴胺能神经元发育

图3. VitroGel® NEURON 水凝胶支持 3D 多巴胺能神经元的分化

iPSC 使用 RocketCell™ 3D iPSC 完全培养试剂盒（AOF）进行 3D 培养，共培养 6 代，随后分化形成底板神经上皮球体（Floor Plate Neuro-Epithelial Spheroids）。

使用 VitroGel® 类器官回收液（Organoid Recovery Solution）从水凝胶中回收球体，并使用 RocketCell™ NSC 完全培养试剂盒（AOF）进行 3D 培养（A，Day 0）。

为诱导 NSC 分化为多巴胺能神经元，将培养基更换为 RocketCell™ NSC-Neuron 神经元分化生长培养基。细胞在该培养基中继续培养 16 天（A，Day 16）。

样品经固定后，使用 β-III-tubulin 和 DAPI 进行染色（B）。

结果显示，大多数球体均由神经元构成，并且在较高放大倍数下可以清晰观察到轴突之间形成的连接。

 

3D：案例 4

NSC 3D 包埋培养

图4. 使用 VitroGel® NEURON 水凝胶对 NSC 进行 3D 包埋培养，形成具有分区突起的 NSC 球体

iPSC 使用 RocketCell™ 3D iPSC 完全培养试剂盒（AOF）进行培养和扩增。随后使用 VitroGel® 类器官回收液（Organoid Recovery Solution）从水凝胶中回收细胞，并将其包埋于 VitroGel® NEURON 中，同时添加 CytoGrow™ 生长因子，诱导 iPSC 分化为神经干细胞（NSC）。

随后，使用 RocketCell™ NSC 神经元分化试剂盒（RocketCell™ NSC Neuron Differentiation Kit）将 NSC 进一步分化为多巴胺能神经元。