RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 无动物源诱导多能干细胞生长培养基应用案例

A. iPSCs 接种于 CytoGrow™ Vitronectin 包被的 VitroPrime™ 6 孔板中，使用 RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 培养 4–7 天。

B. 通过检测细胞汇合度（confluence）随时间的变化对 iPSC 的生长情况进行定量分析。每 4 小时采集一次图像，并以初始时间点 T = 0 + 24 小时的数据作为参照进行分析。

 

2D：案例 2

在 RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 中扩增的 iPSCs 在 CytoGrow™ Vitronectin 或 Geltrex 包被条件下的形态特征

图 2：CytoGrow™ Vitronectin 包被的 VitroPrime™ Spread-Attach 培养板支持 iPSCs 的典型形态

在 Supplier C 的培养皿中，使用 Vitronectin 或 Geltrex 包被培养 iPSCs。随后采用 PBS/EDTA 法进行传代，并将细胞分别接种于 CytoGrow™ Vitronectin 包被的 VitroPrime™ 24 孔板，以及经 Geltrex 包被的 Supplier C 24 孔板中。接种时加入 Rock 抑制剂（2 μM Thiazovivin）。

第二天更换培养基，且不再添加 Rock 抑制剂；之后每隔一天换液一次，持续培养最长 7 天。使用 Olympus CKX41 显微镜配合 Canon EOS Rebel T3i 数码单反相机对细胞进行观察和拍照。

显微图像使用 Adobe Lightroom 进行优化处理。比例尺为 100 μm。

已知 iPSCs 通常以细胞集落（colony）的形式生长，其典型形态表现为：细胞质较小且紧密、细胞核明显，并具有清晰的核仁。在 Vitronectin 包被的 VitroPrime™ 培养板和 Geltrex 包被的 Supplier C 培养板中培养的细胞均呈现上述典型形态。

这表明 RocketCell™ / CytoGrow™ / VitroPrime™ 平台可作为一种适用于 iPSCs 扩增培养的培养体系。

 

2D：案例 3

RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 培养的 iPSCs 的免疫染色

图 3：RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 培养的 iPSCs 的免疫染色

将 iPSCs 培养于 CytoGrow™ Vitronectin 包被的 24 孔板中，并采用标准方法进行间接免疫荧光染色。

样品分别进行以下组合的抗体染色：

• 左图（LEFT）：使用 抗 SSEA1 和 SSEA4 抗体进行染色，随后分别使用荧光标记的二抗 goat-anti-mouse IgM-Alexa Fluor 488 或 IgG3-Alexa Fluor 594。

• 右图（RIGHT）：使用 抗 Oct4 和抗 Lin28 抗体进行染色，随后分别使用 goat-anti-rabbit-Alexa Fluor 594 和 mouse IgG1-Alexa Fluor 488。

随后使用 Hoechst 33342（2.5 μg/mL）进行复染 10 分钟。样品使用 Keyence BZ-X 系统进行观察。

结果显示，该 iPSC 培养体系能够维持 iPSCs 的典型多能性标志物，同时抑制细胞分化。其中 SSEA1 几乎没有或完全没有出现染色信号（见左图中的白色箭头），进一步表明该培养体系有助于维持 iPSCs 的未分化状态。

 

 

图 3B：RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 培养的 iPSCs 的免疫染色

将 iPSCs 培养于 CytoGrow™ Vitronectin 包被的 24 孔板中，并采用标准方法进行间接免疫荧光染色。

样品使用抗 Oct4 抗体和抗 Lin28 抗体进行组合染色，随后分别使用 goat-anti-rabbit-Alexa Fluor 594 和 mouse IgG1-Alexa Fluor 488 进行荧光标记检测。

随后使用 Hoechst 33342（2.5 μg/mL）进行复染 10 分钟。样品使用 Keyence BZ-X 系统进行观察。

结果表明，RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 能够维持 iPSCs 预期的典型多能性标志物，说明该培养基有助于维持 iPSCs 的多能性状态。

 

3D：案例 1

VitroGel® STEM Hydrogel 中培养的 iPSCs 的间接免疫荧光染色

RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 可维持 iPSCs 的多能性

图 4：使用 RocketCell™ 3D iPSC Complete Growth Kit, AOF 培养的 iPSCs 多能性标志物的间接免疫荧光染色

将 iPSCs 以 100,000 个细胞/孔的密度接种于 24 孔 VitroPrime™ 3D Culture and Imaging Plate 中，培养 7 天后进行固定，并使用多能性标志物 Tra-1-60、Lin28 和 Oct4 进行免疫荧光染色。随后分别使用 Alexa Fluor 488、594 和 647 标记的二抗进行荧光检测。

使用 Leica MICA 共聚焦显微镜采集图像。

结果表明，RocketCell™ 3D iPSC Growth Kit 能够提供支持 iPSCs 多能性维持的 3D 微环境。

 

3D：案例 2

VitroGel® STEM Hydrogel 中培养的 iPSCs 的直接免疫荧光染色

RocketCell™ iPSC Growth Medium, AOF 可维持 iPSCs 的多能性

图 5：使用 RocketCell™ 3D iPSC Complete Growth Kit, AOF 培养的 iPSCs（HFF-1VL，TheWell Bioscience）的直接免疫荧光染色

将 iPSCs（100,000 个细胞/孔）接种于 24 孔 VitroPrime™ 3D Culture and Imaging Plate 中，培养 7 天后进行固定，并使用直接标记的多能性标志物抗体进行染色：

• Lin28（Alexa Fluor 488）

• Podocalyxin（Alexa Fluor 594）

• Nanog（Alexa Fluor 647）

使用 Leica MICA 共聚焦显微镜采集图像。

结果表明，RocketCell™ 3D iPSC Complete Growth Kit, AOF 能够提供有利于维持多能干细胞多能性的 3D 培养环境。同时，采用直接标记抗体进行染色，可以实现更快速、更高效的基于水凝胶的样品处理。