细胞增殖测定（使用CCK-8测定法）

推荐的材料和试剂

• 使用VitroGel系统培养的细胞

• 细胞计数试剂盒-8（CCK-8）试剂

• 细胞

• VitroGel水凝胶

• 细胞培养基

• 微量移液器

• 阅读板读数器

方案： 

制作标准曲线

（以96孔板为例，每孔50 µL水凝胶，覆盖介质50 µL）

1. 在含有梯度细胞数量的培养基中准备细胞悬液（例如，细胞密度从1x10^5到5x10^6个细胞/mL）。

2. 根据VitroGel用户手册的指导，将VitroGel水凝胶与细胞悬液混合。

3. 向96孔板的每个孔中加入50 μL水凝胶-细胞混合物。

注意：每个孔中细胞数量的最终梯度应为每孔1,000个细胞到每孔25,000个细胞，其中间包括5-7个梯度点，并在每个点重复3-5次。

4. 等待水凝胶稳定10-20分钟，然后加入50 μL细胞培养基覆盖水凝胶。

5. 在37°C下孵育约2-4小时。

6. 向水凝胶顶部的覆盖介质中加入10 μL CCK-8。轻轻摇动板以确保CCK-8均匀分布。

7. 在37°C下暗中（远离光线）孵育约2小时。

8. 在读板之前，轻轻摇动板以确保颜色均匀分布。

9. 使用微孔板读数器在450 nm处测量吸光度。

10. 使用细胞数量作为X轴和O.D.值作为Y轴制作标准曲线。

注意：使用此标准曲线的前提是细胞培养条件相同。

细胞增殖测定

1. 在96孔板中使用VitroGel培养细胞（每个孔加入50 μL水凝胶和50 μL覆盖培养基）。

2. 向板的每个孔中加入10 μL CCK-8溶液。轻轻摇动板以确保CCK-8均匀分布。

注意：小心不要将气泡引入孔中，因为它们会干扰光密度读数。

可选：在加入CCK-8溶液之前，移除50 μL覆盖培养基，并加入新的50 μL覆盖培养基。

细胞增殖测定（续）

3. 在37°C下暗中（远离光线）孵育板约2小时。

4. 在读板之前，轻轻摇动板以确保颜色均匀分布。

5. 使用微孔板读数器在450 nm处测量吸光度。

6. 记录吸光度值，并使用标准曲线将吸光度值转换为细胞数量。

7. 在不同的时间点（例如每24-48小时）重复步骤2-6。