细胞荧光染色在凝胶中用于细胞核和肌动蛋白丝

推荐的材料和试剂

• 使用VitroGel系统培养的细胞

• DPBS（洗涤缓冲液，无钙，无镁）

• 微量移液器

• 固定液（4%甲醛溶液）

• 渗透液（0.1% Triton X-100）

• 阻断液（3% BSA在DPBS中）

• F-肌动蛋白丝染色溶液（例如：ThermoFisher Scientific的ActinGreenTM 488 ReadyProbesTM试剂，产品编号：R37110）

• 细胞核染色溶液（例如：ThermoFisher Scientific的NucBlueTM Fixed Cell Stain ReadyProbesTM试剂，产品编号：R37606）

• 微量移液器；低吸附移液器吸头

• 荧光显微镜

方案：（以96孔板为例，每孔50 µL水凝胶）

1. 将水凝胶顶部的覆盖培养基移除。

2. 用DPBS洗涤水凝胶：向水凝胶顶部加入100 µL DPBS，等待1分钟后丢弃。洗涤3次。

3. 加入100 µL固定液，并在室温孵育15-30分钟。

4. 移除固定液，用100 µL DPBS洗涤3次。

5. 加入100 µL渗透液，并在室温孵育5分钟。

注意：如果渗透液孵育超过15分钟，可能会导致水凝胶软化或缓慢溶解。如果需要超过5分钟，则在4°C下孵育。

6. 移除渗透液，并用100 µL DPBS小心地洗涤3次。

7. 加入100 µL阻断液，并在室温孵育60分钟。

8. 移除阻断液，加入100 µL F-肌动蛋白丝染色溶液*，并在黑暗中室温孵育30-60分钟。

9. 移除F-肌动蛋白丝染色溶液，并用DPBS洗涤3次。

10. 加入细胞核染色溶液*，并在黑暗中室温孵育5分钟。孵育后，样品即可进行荧光成像。

*根据产品手册准备F-肌动蛋白丝染色溶液和细胞核染色溶液的工作溶液：向1 mL DPBS中加入2滴试剂。

用于下游分析的细胞裂解

重要提示：

• 该方案适用于3D水凝胶培养和2D水凝胶涂层培养。

• 如果使用不同的染色溶液，请根据产品手册准备染色溶液。最终染色溶液的浓度和孵育时间可能需要根据不同的细胞类型和水凝胶大小进行优化。

• 在洗涤步骤中，小心地加入或移除溶液，以避免可能导致水凝胶/细胞丢失。