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技术资料/正文
实验干货|染色质免疫沉淀法（ChIP)实验原理及应用
148 人阅读发布时间：2023-01-12 17:18
染色质免疫沉淀法（ChIP)实验
一、介绍
染色质免疫沉淀 (ChIP) 是一种用于表观遗传学研究的技术，可以快速反映蛋白质-DNA 相互作用。
二、实验步骤
1. 实验流程
使用ChIP稀释溶液把超声染色质液体稀释10倍，这样有利于免疫沉淀反应。为了减少非特异性结合蛋白背景，往2 mL超声稀释液中加入20μL蛋白A/G琼脂糖珠（Protein A/G Agarose Beads),在4℃摇床轻柔摇动1 h。
在洗脱步骤完成后吸取洗脱上清时要格外注意，防止吸走微珠而造成样品污染。同时要注意每个样品管吸取等量的上清，防止造成样品间误差。
作者分别使用了两种细胞U87和U251，验证SP1对于H19的转录调控作用。用SP1抗体进行ChIP实验。富集到的DNA进行qPCR检测，结果显示SP1能够调控H19启动子的转录。
三、我们的优势
一、介绍
染色质免疫沉淀 (ChIP) 是一种用于表观遗传学研究的技术，可以快速反映蛋白质-DNA 相互作用。
- 概念
- 原理
二、实验步骤
1. 实验流程
2.ChIP实验关键步骤
1）细胞的准备及固定
细胞在培养皿上生长到80% ~90%。当第一次做实验时，可以同时准备两个培养皿，一个用于预测细胞数量（细胞量最低为105），另外一个用于优化超声条件。
2）染色质超声断裂
加入SDS裂解溶液重悬沉淀，在冰上放置10 min,每隔1 min颠倒摇动离心管。SDS能裂解细胞膜和核膜，使固定染色质释放出来， 这样有利于超声。
3）免疫沉淀蛋白和DNA复合物
所有染色质免疫沉淀步骤都必须低温（冰上或 4℃）操作使用ChIP稀释溶液把超声染色质液体稀释10倍，这样有利于免疫沉淀反应。为了减少非特异性结合蛋白背景，往2 mL超声稀释液中加入20μL蛋白A/G琼脂糖珠（Protein A/G Agarose Beads),在4℃摇床轻柔摇动1 h。
4）洗脱、解交联
从这一步开始，所有操作都在室温进行。在洗脱步骤完成后吸取洗脱上清时要格外注意，防止吸走微珠而造成样品污染。同时要注意每个样品管吸取等量的上清，防止造成样品间误差。
5）DNA 纯化
DNA纯化可以通过酚/氯仿抽提或者通过硅胶柱纯化。
6）鉴定
一旦完成了 DNA 纯化，便可进行多种下游分析，包括ChIP-PCR、ChIP-qPCR、ChIP-芯片和ChIP-seq。
3.文献分析
Hypoxia induces H19 expression through direct and indirect Hif-1α activity, promoting oncogenic effects in glioblastoma作者分别使用了两种细胞U87和U251，验证SP1对于H19的转录调控作用。用SP1抗体进行ChIP实验。富集到的DNA进行qPCR检测，结果显示SP1能够调控H19启动子的转录。
- 实验数据真实可靠，有据可循
- 严格设置分组，保证结果的完整性
- 出具详细的实验报告及数据分析