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技术资料/正文
实验干货|免疫共沉淀（CoIP）实验原理及应用
192 人阅读发布时间：2023-01-12 16:51
免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上，通过进一步与其它技术的结合，如聚丙烯酰胺凝胶电泳，还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。下面对此进行详细介绍。
2.要确保抗体的特异性，如果抗体不能和细胞溶解物中的抗原结合，则不会引起共沉淀反应;
3.确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的。
western blotting结果显示，在共转染Flag-Lgr5和Myc-PDCD5的细胞中，抗flag抗体能免疫沉淀Flag-Lgr5/Myc-PDCD5复合物，而在仅转染Flag-Lgr5的细胞中，抗flag抗体不能免疫沉淀Myc-PDCD5。抗Lgr5抗体可以检测抗PDCD5沉淀的免疫复合体中的Lgr5，而不能检测IgG抗体。抗Lgr5抗体的免疫沉淀也证实了Lgr5和PDCD5之间的相互作用。
＊提供详细专业的实验报告与数据分析
＊严格设置实验分组，保证实验结果的完整性
一、原理
- 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗体特异性反应，对某个特定蛋白纯化富集的方法，主要过程包括捕获和固定。
- 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP实验的基础上进行的扩展，主要用于蛋白之间的互作研究，常被用于鉴定特定蛋白复合物的中已知或未知的蛋白组分。其原理是基于抗体与抗原（靶蛋白）之间的特异性结合，此时如果样品溶液中存在能与靶蛋白相互作用的目的蛋白，会一同被拉下来，随后利用SDS-PAGE，Western Blot等方法对得到的目标蛋白进行分析，进而证明两者间的相互作用。
二、CoIP的实验操作流程
三、注意事项
1.确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体具有特异性强、可大量生产、易标准化等优点，使用单克隆抗体有助于避免污染的发生；
2.要确保抗体的特异性，如果抗体不能和细胞溶解物中的抗原结合，则不会引起共沉淀反应;
3.确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的。
四、实验技巧
为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是由于某些方面造成的人工相互作用（也就是“假阳性”），在Co-IP 的实验设计过程中，需要设置正确的对照。假设Co-IP 实验的实验组为“磁珠+抗X 抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”，则可能出现的“假阳性”及对应需要设置的实验对照如下表所示：
五、CoIP实验结果解读
Lgr5-mediated p53 Repression through PDCD5 leads to doxorubicin resistance in Hepatocellular Carcinoma（IF：11.600）
六、我们的优势
＊实验数据真实可靠，有据可循
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