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蛋白质很少单独作战。在肿瘤、心血管、神经退行性疾病等临床问题的机制研究中 ，"某蛋白通过结合某蛋白发挥功能"几乎是一区文章标准的故事线。而要把这条故事线讲 圆 ，GST pull-down 是最经典、最不可或缺的体外互作验证手段之一。

很多临床课题停在“ 某分子高表达、与预后相关” 。一区文章更常追问：它到底抓住谁、被谁修饰、把谁送进核内或溶酶体，阻断这个接触面能否改变表型。Co-IP （co-immunoprecipitation ，免疫共沉淀）正是把“ 相关”推进到“ 相互作用—修饰—定位—干预” 的第一块硬证据。

线粒体相关膜（Mitochondria-Associated Membranes, MAMs）是内质网与线粒体外膜紧密接触形成的特殊膜结构区域，近年来在肿瘤、神经退行性疾病、糖尿病及心血管疾病等研究领域受到广泛关注。本文从 MAMs 的生物学功能入手，系统梳理其分离、鉴定的标准化技术流程与常见技术要点，并整理了相关技术服务的市场参考价格，供科研人员与行业人士参考。

在 Top 期刊（Advanced Science、Journal of Advanced Research、Signal Transduction and Targeted Therapy 等）的药物机制研究中，「直接结合证据」已成为天然产物/小分子机制文章的审稿硬门槛。MST 之所以成为一区文章的常客 ，原因在于它恰好补齐了机制研究证据链中最薄弱的一环

线粒体是细胞的能量工厂，其能量代谢状态与肿瘤、神经退行性疾病、糖尿病、心力衰竭及衰老等多种疾病密切相关。近年来，以 Seahorse 细胞能量代谢分析为代表的检测技术不断普及，线粒体能量代谢研究已成为基础医学与转化研究的热点方向。本文梳理线粒体产能的基本机制、主要检测指标与方法，并整理了常用检测项目的市场参考价格，供科研人员与行业人士参考。

候选化合物到靶点验证，CETSA 帮你补上最关键的一环

CETSA 的价值，不是再做一次“药物有没有效”，而是在更接近真实细胞环境的条件下，观察候选分子是否改变目标蛋白的热稳定性，为靶点结合和靶点参与提供直接证据。

从中科院一区论文看 SPR 如何回答“是否直接结合、结合多强、机制是否成立”

Ribo-seq 又称核糖体足迹测序。核酸酶消化未被保护的RNA后，核糖体覆盖的短mRNA片段被保留下来，称为核糖体保护片段（RPF）。对这些片段建库测序、比对并定位，可获得转录本上的核糖体占据分布

很多项目并不是“没有峰”，而是在可及性、转录因子占位和转录输出之间跨得太快。本文把 ATAC-seq 能回答、不能回答，以及什么时候该补做其他实验讲清楚。

CUT&Tag 的全称是 Cleavage Under Targets and Tagmentation。实验先用一抗识别目标蛋白或组蛋白修饰，再通过二抗及 Protein A–Tn5 融合蛋白把转座酶定位到靶标附近；加入 Mg²⁺ 后，Tn5 在局部 DNA 上完成切割并插入测序接头，随后直接 PCR 扩增并测序。

相分离课题真正难的，常常不是拍到几个亮点，而是判断这些亮点意味着什么，以及下一步该用什么实验把结论做实。理解相行为、选择合适读出，再把结果接到功能上，是项目设计最值得花时间的部分。

CUT&RUN（Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease）正适合补上这段证据。它不负责证明液-液相分离，也不能替代活细胞成像；它的价值，是把“核内出现凝聚”继续推进到“染色质上发生了什么”。本文不再重复相分离的基础判据，而是把重点放在 CUT&RUN 的原理、实验选择和项目设计上。

细胞周期是指细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的时间，细胞周期也是评价细胞增殖功能的重要实验。流式细胞仪是检测细胞周期最常用的方法，然而我们会碰到细胞量不够、细胞碎片太多等原因，导致实验一次次重复，本文就一起看看如何把细胞周期的数据变的更加漂亮，准确！

以病毒为基础的基因载体，是一种常见的分子生物学工具，利用病毒载体可将目的基因传递至培养的细胞或是完整活体中。目前常用的病毒载体有慢病毒载体（Lentivirus Vector，LV），腺病毒载体（Adenovirus Vector，AdV）和腺相关病毒载体（Adeno-associated virus Vector）等。

启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列，多数位于结构基因转录起始点的上游,启动子本身不被转录。

细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束生命，最后裂解为若干凋亡小体，被其他细胞吞噬的过程，也称为程序性细胞死亡。

ROS水平的变化常被用作监测细胞铁死亡水平的指标。因此，针对不同的铁死亡效应，可采取多种ROS检测手段。

细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束生命，最后裂解为若干凋亡小体，被其他细胞吞噬的过程，也称为程序性细胞死亡。细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定的方式，凋亡过程是由基因控制的细胞主动死亡过程。

腺相关病毒常见问题与解答——看这一篇就够了