【点成干货】 如何使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪进行体细胞计数

使用点成LUNA-FX7™自动细胞计数仪进行体细胞计数

1 简介

体细胞计数（SCC）是乳品行业用于管理乳房健康的一个成熟参数。体细胞计数的增加表明存在乳房内感染（IMI），进而引发乳腺炎。这种情况可能导致受孕率低下并影响牛奶产量。因此奶牛场会使用基于流式细胞术的细胞计数仪，如 FossoMatic。尽管这种方法对于高通量分析很有效，但在研究领域中仍需要一种成本较低的方法来计数小样本量的细胞。

由于牛奶中存在脂肪和蛋白质碎片，对牛奶中的体细胞计数颇具挑战性。为了解决这个问题，已开发出体细胞染色液，以便与点成 LUNA-FX7™ 配合，进行简单直接的体细胞计数。在本文中，我们展示了点成 LUNA-FX7™ 自动细胞计数仪使用体细胞染色液高效计数牛奶中体细胞的能力。

2 材料与方法

从 POSTBIO 公司获取了高、中、低浓度的生鲜牛奶样本。只有低浓度样本的体细胞计数低于每毫升 2×10⁵个细胞。将每个牛奶样本与体细胞染色液（产品编号 F23101）按 1:4 的比例混合。使用点成 LUNA-FX7™ 搭配单通道载玻片（产品编号 L72011）进行细胞计数。在荧光细胞计数模式下采用了经过修改的参数配置（表 1）。

3 染色原理

由于牛奶中的脂肪和蛋白质碎片，在明场（BF）通道中进行体细胞计数效果不佳（图 1A），因为牛奶中的这些碎片在点成 LUNA-FX7™ 可检测的波长下几乎没有荧光信号，所以使用含有碘化丙啶（PI）的体细胞染色液来进行体细胞计数。该染色液还含有一种去污剂，可诱导细胞裂解，碘化丙啶无法穿透完整的细胞。一旦细胞被通透，碘化丙啶就会通过插入碱基对之间与 DNA 结合，结合后其荧光强度会增加 20 至 30 倍。这使得能够准确区分牛奶中的体细胞和碎片。因此在进行体细胞计数时不会受到牛奶中碎片的干扰。

4 结果

对点成 LUNA-FX7™ 的结果进行了仔细分析和检查，以确认碘化丙啶标记和识别的体细胞是否准确。从标记图像中可以看出，点成LUNA-FX7™ 成功区分了牛奶中的体细胞和碎片（图 1A）。此外，将点成 LUNA-FX7™ 的体细胞计数结果与基于流式细胞术的细胞计数仪的已知浓度进行了比较。结果显示，两种不同平台的结果之间具有很强的相关性（低浓度样本低于每毫升 2×10⁵个细胞）（图 1B）。

表 1.点成 LUNA-FX7™ 荧光细胞计数模式下体细胞计数的优化参数设置

 

 

图 1. （A）该图像显示了使用点成 LUNA-FX7™ 成功染色并标记的牛奶样本中的体细胞。

（B）柱状图显示了点成 LUNA-FX7™ 和基于流式细胞术的细胞计数仪所获得的体细胞计数数据之间具有很强的相关性。

5 结论

本文证明了点成 LUNA-FX7™ 自动细胞计数仪能够使用体细胞染色液有效地对体细胞进行计数。同时点成LUNA-FX7™ 和基于流式细胞术的细胞计数仪的体细胞计数结果比较显示，二者之间具有很强的相关性。因此，点成LUNA-FX7™ 自动细胞计数仪功能多样，可用于包括体细胞计数在内的多种应用。