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技术资料/正文
时光分辨荧光微球使用方法
642 人阅读发布时间：2024-07-08 15:03
简介
时光分辨荧光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)，是一种特殊的微球，每个微球中可包裹上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度；同时微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能团，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高了标记物的稳定性。其制备原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物，由于这种标记物Stokes位移大(通常大于150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高很多，因此，测定时只要延缓测量时间，待本底物质的荧光充分衰减后再测定标记物的信号就可有效地消除各种非特异性荧光的干扰，获得很高的灵敏度。
使用方法
一、活化
1.超声分散微球，然后摇匀；
2、在2mL的EP管中，加入适量微球（固含1%），再加水（或MES缓冲液），待用；
3、配制：10mg/ml N-径基境珀能亚胺（NHS）乙醇溶液，A液和10mgy/ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基硫二亚胺盐酸盐（EDC)乙醇溶液，B液；
注意：NHS、EDC都易吸潮。
4、在微球悬液中加入适量A液、混匀，再加入适量B液、混匀，室温反应15~30min；
3、离心，去上清，加入适量水（或抗体偶联缓冲液）.然后超声分散均匀。
注意：一定要彻底分数，否则交联抗体后的微球容易团聚，条带会差。
二、抗体偶联
抗体偶联之前避免产生沉淀。抗体偶联缓冲液推荐硼酸缓冲液，合适的浓度和pH需自行测定。
抗体交联步骤：
1、取适量活化后的微球悬液，超声分散，边搅拌边滴加抗体；
2、在室温下混匀1小时，然后检测偶联抗体后微球的性能；
注意：可用试纸条检测抗体交联后微球的流动性、抗体识别性能等。
3、加BSA封闭1小时；
4、离心；
5、取适量保存液加入到离心后的微球中，混匀，冷藏避光保存，待用
时光分辨荧光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)，是一种特殊的微球，每个微球中可包裹上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度；同时微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能团，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高了标记物的稳定性。其制备原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物，由于这种标记物Stokes位移大(通常大于150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高很多，因此，测定时只要延缓测量时间，待本底物质的荧光充分衰减后再测定标记物的信号就可有效地消除各种非特异性荧光的干扰，获得很高的灵敏度。
使用方法
一、活化
1.超声分散微球，然后摇匀；
2、在2mL的EP管中，加入适量微球（固含1%），再加水（或MES缓冲液），待用；
3、配制：10mg/ml N-径基境珀能亚胺（NHS）乙醇溶液，A液和10mgy/ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基硫二亚胺盐酸盐（EDC)乙醇溶液，B液；
注意：NHS、EDC都易吸潮。
4、在微球悬液中加入适量A液、混匀，再加入适量B液、混匀，室温反应15~30min；
3、离心，去上清，加入适量水（或抗体偶联缓冲液）.然后超声分散均匀。
注意：一定要彻底分数，否则交联抗体后的微球容易团聚，条带会差。
二、抗体偶联
抗体偶联之前避免产生沉淀。抗体偶联缓冲液推荐硼酸缓冲液，合适的浓度和pH需自行测定。
抗体交联步骤：
1、取适量活化后的微球悬液，超声分散，边搅拌边滴加抗体；
2、在室温下混匀1小时，然后检测偶联抗体后微球的性能；
注意：可用试纸条检测抗体交联后微球的流动性、抗体识别性能等。
3、加BSA封闭1小时；
4、离心；
5、取适量保存液加入到离心后的微球中，混匀，冷藏避光保存，待用