细胞培养常见问题及解决（三）

21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株， 无法以其外观分辨之。
22.支原体污染会对细胞培养有何影响？
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞
为 mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。23. 侦测出细胞株有支原体污染时， 该如何处理？
直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。
24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？
定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
25.为何培养基保存于 4 °C 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且 pH 值会越来越偏碱性？
培养基保存于 4 °C 冰箱中， 培养基内之 CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中
之酸碱指示剂(通常为 phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细
胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之 CO2， 以调整 pH 值。
26. 各种细胞培养用的 dish，flask 是否均相同？
不同厂牌的 dish 或 flask， 其所 coating 的 polymer 不同， 制造程序亦不同， 虽对大部分细胞没有
太大之影响， 惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之 dish 或 flask 而有显著之生长差异。
27. 购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？
研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少， 大都是因为离心过程操作上的失误， 造成细胞的
物理性损伤， 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心， 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即
可。
28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血
清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后， 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误
认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。
30.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白
质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终
定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。