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细胞培养常见问题及解决(四)

902 人阅读发布时间:2023-09-04 13:55

31.GlutaMAX-I 是什么?培养细胞如何利用 GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
GlutaMAX-I 二肽是一个 L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的 alpha-氨基用 L-丙氨酸来保护。一种肽酶
逐渐裂解二肽,释放 L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I 二肽非常稳定,即使在 121 磅灭菌 20 分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果
在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。
32.什么培养基中可以省去加酚红?
酚红在培养基中用作 PH 值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚
红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚
红的培养基。
33.如何用台盼兰计数活细胞?
用无血清培养基把细胞悬液稀释到 2002000 /毫升,在 0.1 毫升细胞悬液中加 0.1 毫升 0.4%的台盼
兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色细胞是死
细胞。
34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡
萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。
35.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么?
二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的
活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用 EDTA 清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。
36.室温下配制的 Tris-HCl 溶液,在 37℃使用时 PH 值是多少?
缓冲液 PH 值随温度变化而变化。下表列出了 50mM Tris-HC 溶液在 4℃,25℃,37℃时,不同 PH 值。
50mM Tris-HC 溶液在 4℃,25℃,37℃时,不同 PH
4°C   25°C   37°C
8.1    8.5      7.2
8.2    7.6      7.3
8.3    7.7      7.4
8.4    7.8      7.5
8.5    7.9      7.6
8.6    8.0      7.7
8.7    8.1      7.8
8.8    8.2      7.9
8.9    8.3      8.0
9.0    8.4      8.1
9.1    8.5      8.2
9.2    8.6      8.3
9.3    8.7      8.4
9.4    8.8      8.5
37.如何从 T25 瓶中转移 sf9 细胞?能用胰蛋白酶消化吗?
我们推荐使用脱落细胞的方法,此技术破坏性最小,生活力最高。通过使用巴斯德吸液管,让细胞上
培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下,才使用胰酶消化细
胞。
38.胰酶消化一个 T25 瓶的 sf9 细胞:
1. 去除培养基。
2. 2ml 1xPBS(足以覆盖细胞表面)洗涤细胞,去除 PBS
3. 加入 2ml 1x 胰酶 EDTA(恰好覆盖细胞表面)。
4. 37 ℃孵育 5 10 分钟。在仪器下检测看到 5 分钟后它们正在向上移动。
5. 向细胞中加入 2ml 细胞培养液,移入锥形管,用 2ml 培养液洗瓶壁,移入同一锥形管中。(培养
基中的 FBS 终止了胰酶的活性。)
6. 离心(1100rpm)沉淀细胞。去除培养基。
7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。
 
资料格式:

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