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浙江美森细胞科技有限公司品牌商
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自营
美森细胞
细胞库 / 细胞培养
已认证品牌介绍
浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
代理
Merck
试剂
已认证品牌介绍
默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
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默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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美森细胞
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已认证品牌介绍
浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
代理
Merck
试剂
已认证品牌介绍
默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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技术资料/正文
细胞冻存步骤
6019 人阅读发布时间：2021-09-09 16:01
细胞冻存步骤
前期准备：
一.资料准备：查阅说明书或相关文献，了解细胞的形态（表皮样or成纤维样or圆形）；明确细胞的生长特性（贴壁or悬浮）；明确细胞所需完全培养基(DMEM、RPMI-1640、DMEM/F-12)
二.操作准备：
①准备：装有碎冰的盒子，打印冻存细胞的标签、冻存管
②用70%酒精消毒双手；生物安全柜超净台打开紫外线照射30min；打开37℃恒温水浴锅、离心机以及倒置显微镜；紫外线照射完毕，拉起玻璃罩至灯亮，打开风循环，灯重新亮起后才能进操作台操作。
③在超净台里，准备好冻存管，并贴上标签。
④准备离心管（50ml+15ml）、移液管(5ml+10ml)、枪头盒、移液枪。所有物品在进入超净台前用70%酒精消毒。
⑤试剂准备：PBS、胰蛋白酶（Trypsin）：-20℃冰箱中取出，37℃水浴锅解冻（注意：不要摇晃离心管，以免溶液溅到管口易污染）。所有装试剂离心管用70%酒精消毒，再移入超净台。没用完试剂保存在4℃冰箱。
⑥准备细胞相对应培养基（比如DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti）
⑦冻存液准备：现用现配（细胞所需的完全培养基+10%DMSO），配好后置于碎冰盒里保凉，要用时用70%酒精消毒，再移入超净台。
①从培养箱中拿出细胞，培养皿入操作台，吸除上清液，加入PBS洗涤(加好后不要晃动以免细胞飘起）10cm培养皿加2ml PBS ，6cm培养皿加1ml PBS，T12.5培养瓶加1mlPBS，T25培养瓶加2ml PBS
②吸干净PBS，用移液管吹吸均匀胰酶，把胰酶加入培养皿（10cm培养皿加2ml ，6cm培养皿加1ml，T12.5培养瓶加1ml，T25培养瓶加2ml）。轻轻摇晃培养皿，使胰酶均匀覆盖。放入37℃细胞培养箱消化4～6min，打开计时器计时（每隔2分钟可去观察一次细胞是否消化下来）
③从培养箱中取出培养皿，放入倒置显微镜下观察细胞呈悬浮状，圆形即可（贴壁劳的细胞可以用移液枪吹打一下，细胞是否脱落），若细胞已呈悬浮状，则按1:1（胰蛋白酶：培养基）比例加入培养基混合，用移液管吹打均匀。
④将吹打好的细胞液全部收集装入离心管中（根据细胞液选择不同容量的离心管），用移液管吹打均匀
⑤用移液枪取10ul细胞悬液进行细胞计数（计数是为了计算出可以冻存的管数，保证每个冻存管中细胞数量至少有10*6/ml，才能不影响后续细胞复苏的问题）
⑥将装有细胞悬液的离心管放入离心机中进行离心，1500r,5min。若上清中还有细胞再离2-3分钟。
⑦冻存液管用70%酒精消毒，再移入操作台，将离心管取出，吸掉上清液，把冻存液（冻多少管数加多少ml的冻存液）加有细胞的离心管中，用移液管吹打均匀。
⑧每只冻存管中装入1ml的细胞悬液，将装好细胞悬液的冻存管拧紧放入梯度冻存盒中，迅速把梯度冻存盒拿到-80℃冰箱中冻存。
⑨拿酒精喷洒操作台，用纸从里到外擦拭一遍，将所有东西归位，拉下玻璃罩，打开紫外线照射30min
⑩第二天需要去-80℃的冰箱中，把冻存一整夜的细胞转移到液氮罐中。
更多见下面文档
前期准备：
一.资料准备：查阅说明书或相关文献，了解细胞的形态（表皮样or成纤维样or圆形）；明确细胞的生长特性（贴壁or悬浮）；明确细胞所需完全培养基(DMEM、RPMI-1640、DMEM/F-12)
二.操作准备：
①准备：装有碎冰的盒子，打印冻存细胞的标签、冻存管
②用70%酒精消毒双手；生物安全柜超净台打开紫外线照射30min；打开37℃恒温水浴锅、离心机以及倒置显微镜；紫外线照射完毕，拉起玻璃罩至灯亮，打开风循环，灯重新亮起后才能进操作台操作。
③在超净台里，准备好冻存管，并贴上标签。
④准备离心管（50ml+15ml）、移液管(5ml+10ml)、枪头盒、移液枪。所有物品在进入超净台前用70%酒精消毒。
⑤试剂准备：PBS、胰蛋白酶（Trypsin）：-20℃冰箱中取出，37℃水浴锅解冻（注意：不要摇晃离心管，以免溶液溅到管口易污染）。所有装试剂离心管用70%酒精消毒，再移入超净台。没用完试剂保存在4℃冰箱。
⑥准备细胞相对应培养基（比如DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti）
⑦冻存液准备：现用现配（细胞所需的完全培养基+10%DMSO），配好后置于碎冰盒里保凉，要用时用70%酒精消毒，再移入超净台。
操作步骤：
贴壁细胞①从培养箱中拿出细胞，培养皿入操作台，吸除上清液，加入PBS洗涤(加好后不要晃动以免细胞飘起）10cm培养皿加2ml PBS ，6cm培养皿加1ml PBS，T12.5培养瓶加1mlPBS，T25培养瓶加2ml PBS
②吸干净PBS，用移液管吹吸均匀胰酶，把胰酶加入培养皿（10cm培养皿加2ml ，6cm培养皿加1ml，T12.5培养瓶加1ml，T25培养瓶加2ml）。轻轻摇晃培养皿，使胰酶均匀覆盖。放入37℃细胞培养箱消化4～6min，打开计时器计时（每隔2分钟可去观察一次细胞是否消化下来）
③从培养箱中取出培养皿，放入倒置显微镜下观察细胞呈悬浮状，圆形即可（贴壁劳的细胞可以用移液枪吹打一下，细胞是否脱落），若细胞已呈悬浮状，则按1:1（胰蛋白酶：培养基）比例加入培养基混合，用移液管吹打均匀。
④将吹打好的细胞液全部收集装入离心管中（根据细胞液选择不同容量的离心管），用移液管吹打均匀
⑤用移液枪取10ul细胞悬液进行细胞计数（计数是为了计算出可以冻存的管数，保证每个冻存管中细胞数量至少有10*6/ml，才能不影响后续细胞复苏的问题）
⑥将装有细胞悬液的离心管放入离心机中进行离心，1500r,5min。若上清中还有细胞再离2-3分钟。
⑦冻存液管用70%酒精消毒，再移入操作台，将离心管取出，吸掉上清液，把冻存液（冻多少管数加多少ml的冻存液）加有细胞的离心管中，用移液管吹打均匀。
⑧每只冻存管中装入1ml的细胞悬液，将装好细胞悬液的冻存管拧紧放入梯度冻存盒中，迅速把梯度冻存盒拿到-80℃冰箱中冻存。
⑨拿酒精喷洒操作台，用纸从里到外擦拭一遍，将所有东西归位，拉下玻璃罩，打开紫外线照射30min
⑩第二天需要去-80℃的冰箱中，把冻存一整夜的细胞转移到液氮罐中。
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