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浙江美森细胞科技有限公司品牌商
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自营
美森细胞
细胞库 / 细胞培养
已认证品牌介绍
浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
代理
Merck
试剂
已认证品牌介绍
默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
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默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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浙江美森细胞科技有限公司，成立于2019年，依托于浙江磐安大健康产业研究院，具有齐全、一流的研究设备以及18位国家级人才专家团队。美森细胞由国家特聘青年专家四川大学李中瀚教授牵头创立，致力于成为国内一流的细胞制品研发与服务公司，始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”，以卓越的品质、高效的服务构建以Meisen CTCC（Chinese Tissue Culture Collections）为代表的细胞资源平台，为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。同时，美森细胞还汇集了一批充满热情、紧跟科学前沿的科研人员进行新产品开发，通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务；针对客户的个性化需求，定制/改造细胞制品；开发和评估用于科学研究的分析方法和技术；以及将生物材料保存和销售给所有公共或私营企业，以及科研院所（院校）。
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默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体，合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营，是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作，解决生命科学中最棘手的问题。如今，我们提供 300,000 多种产品，包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节，通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台，创建完美的端对端工作流程。了解更多信息，请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线：400-889-1988。 Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团（Merck KGaA） 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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技术资料/正文
细胞传代步骤
4125 人阅读发布时间：2021-09-09 16:01
注意事项
1.进入细胞房前，防护衣物手套要穿戴好；进入细胞房，先要用75%酒精给双手消毒。
2.所有物品进入超净台前，必须用75%酒精消毒。
3.所有的操作在超净台中心完成，勿接近通风口。
4.取试剂时不能触碰试管口，容易造成细胞污染。
5.当有试剂瓶打开时，拿东西避免从开盖容器上方经过，从侧面拿。
6.试管瓶盖要竖放，有两个以上的试管瓶盖竖放时，避免两个试管瓶盖接触，导致交叉污染。
7.操作时，双手尽量打开，避免移液管头、枪头接触到手，容易造成污染。
8.放置物品时避免物体遮住通风口。
9.从培养箱拿细胞前，用75%酒精消毒。
10.从-80℃冰箱或液氮中取冻存管，戴好手套以免冻伤，取放冻存管动作要快。
细胞传代
前期准备：
1.资料准备：查阅说明书或相关文献，了解细胞的形态（表皮样？成纤维样？圆形？）；明确细胞的生长特性（贴壁?悬浮？）；明确细胞所需完全培养基（DMEMorRMPI1640orF-12K 以及FBS比例 ）；明确细胞传代比例。
2.操作准备：
①用70%酒精消毒双手；生物安全柜超净台打开紫外线照射30min；打开37℃恒温水浴锅、离心机以及倒置显微镜；紫外线照射完毕，拉起玻璃罩至灯亮，打开风循环，灯重新亮起后才能进操作台操作。
②准备离心管（50ml+15ml）、移液管(5ml+10ml)、培养皿（贴壁细胞）或培养瓶（悬浮细胞、贴壁细胞均可）、枪头盒、移液枪。所有物品在进入超净台前用70%酒精消毒。
③贴壁细胞准备PBS：分装到50 ml 离心管（标记PBS，操作人）；胰蛋白酶（Trypsin）：-20℃冰箱中取出，37℃水浴锅解冻（注意：不要摇晃离心管，以免溶液溅到管口易污染），避免搞混，可写上姓名。所有装试剂离心管用70%酒精消毒，再移入超净台。没用完试剂保存在4℃冰箱。
④准备细胞相对应培养基，比如：DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti）
一.贴壁细胞操作步骤：
①吸除上清液，沿培养皿侧壁加入PBS洗涤(加好后不要剧烈晃动以免细胞飘起)。（10cm培养皿加2ml PBS ，6cm培养皿加1ml PBS），难消化细胞或者贴壁较紧的细胞可以多洗几次。
②吸净PBS，用移液管吹吸均匀胰酶然后加入培养皿中（10cm培养皿加2ml ，6cm培养皿加1ml）。轻轻上下摇晃培养皿，使胰酶均匀覆盖整个培养皿。放入37℃细胞培养箱消化4～6min，打开计时器计时。（可隔两分钟去观察一次细胞是否都漂浮起来，避免消化过渡）
③从培养箱中取出培养皿，放入倒置显微镜下观察细胞呈悬浮状，圆形即可。贴壁紧的细胞如果大部分细胞已漂浮，少数贴壁的还可以用移液枪吹打一下，看细胞是否脱落。
④若细胞已呈悬浮状，则按1:1（胰蛋白酶：培养基）比例加入培养基混合，用移液管吹打均匀，终止消化。
⑤将吹打好的细胞液全收集到离心管中，将离心管放入离心机中进行离心，1000r-1500r,5min。若离心完放在灯光下看见上清中还有细胞，可再离2-3分钟。
⑥在细胞离心期间，为了节省时间可以准备传代需要的新培养皿，用黑笔在上面写上细胞名称、代数、日期、操作人员。
⑦将离心管取出，吸掉上清液，把计算好培养基量加入离心管中，用移液管吹打3-5次， 吹打均匀后将细胞液装入新的培养皿中（6cm培养皿加3ml-4ml,10cm培养皿加7ml-8ml），轻轻摇晃均匀。（若是传代数量多，可以在⑥号步骤基础上继续操作：先平均在需传代数量的培养皿里预先加入部分的培养基，剩下少部分加入离心管吹匀细胞，再平均分到每个培养皿）。
⑧把传代好的培养皿放到显微镜下观察，是否成为单个的细胞个体，并且是否分布均匀，最后放入37℃恒温细胞培养箱。
⑨拿酒精喷洒操作台，用纸从里到外擦拭一遍，将所有东西归位，拉下玻璃罩，打开紫外线照射30min。
更多见下面文档
1.进入细胞房前，防护衣物手套要穿戴好；进入细胞房，先要用75%酒精给双手消毒。
2.所有物品进入超净台前，必须用75%酒精消毒。
3.所有的操作在超净台中心完成，勿接近通风口。
4.取试剂时不能触碰试管口，容易造成细胞污染。
5.当有试剂瓶打开时，拿东西避免从开盖容器上方经过，从侧面拿。
6.试管瓶盖要竖放，有两个以上的试管瓶盖竖放时，避免两个试管瓶盖接触，导致交叉污染。
7.操作时，双手尽量打开，避免移液管头、枪头接触到手，容易造成污染。
8.放置物品时避免物体遮住通风口。
9.从培养箱拿细胞前，用75%酒精消毒。
10.从-80℃冰箱或液氮中取冻存管，戴好手套以免冻伤，取放冻存管动作要快。
细胞传代
前期准备：
1.资料准备：查阅说明书或相关文献，了解细胞的形态（表皮样？成纤维样？圆形？）；明确细胞的生长特性（贴壁?悬浮？）；明确细胞所需完全培养基（DMEMorRMPI1640orF-12K 以及FBS比例 ）；明确细胞传代比例。
2.操作准备：
①用70%酒精消毒双手；生物安全柜超净台打开紫外线照射30min；打开37℃恒温水浴锅、离心机以及倒置显微镜；紫外线照射完毕，拉起玻璃罩至灯亮，打开风循环，灯重新亮起后才能进操作台操作。
②准备离心管（50ml+15ml）、移液管(5ml+10ml)、培养皿（贴壁细胞）或培养瓶（悬浮细胞、贴壁细胞均可）、枪头盒、移液枪。所有物品在进入超净台前用70%酒精消毒。
③贴壁细胞准备PBS：分装到50 ml 离心管（标记PBS，操作人）；胰蛋白酶（Trypsin）：-20℃冰箱中取出，37℃水浴锅解冻（注意：不要摇晃离心管，以免溶液溅到管口易污染），避免搞混，可写上姓名。所有装试剂离心管用70%酒精消毒，再移入超净台。没用完试剂保存在4℃冰箱。
④准备细胞相对应培养基，比如：DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti）
一.贴壁细胞操作步骤：
①吸除上清液，沿培养皿侧壁加入PBS洗涤(加好后不要剧烈晃动以免细胞飘起)。（10cm培养皿加2ml PBS ，6cm培养皿加1ml PBS），难消化细胞或者贴壁较紧的细胞可以多洗几次。
②吸净PBS，用移液管吹吸均匀胰酶然后加入培养皿中（10cm培养皿加2ml ，6cm培养皿加1ml）。轻轻上下摇晃培养皿，使胰酶均匀覆盖整个培养皿。放入37℃细胞培养箱消化4～6min，打开计时器计时。（可隔两分钟去观察一次细胞是否都漂浮起来，避免消化过渡）
③从培养箱中取出培养皿，放入倒置显微镜下观察细胞呈悬浮状，圆形即可。贴壁紧的细胞如果大部分细胞已漂浮，少数贴壁的还可以用移液枪吹打一下，看细胞是否脱落。
④若细胞已呈悬浮状，则按1:1（胰蛋白酶：培养基）比例加入培养基混合，用移液管吹打均匀，终止消化。
⑤将吹打好的细胞液全收集到离心管中，将离心管放入离心机中进行离心，1000r-1500r,5min。若离心完放在灯光下看见上清中还有细胞，可再离2-3分钟。
⑥在细胞离心期间，为了节省时间可以准备传代需要的新培养皿，用黑笔在上面写上细胞名称、代数、日期、操作人员。
⑦将离心管取出，吸掉上清液，把计算好培养基量加入离心管中，用移液管吹打3-5次， 吹打均匀后将细胞液装入新的培养皿中（6cm培养皿加3ml-4ml,10cm培养皿加7ml-8ml），轻轻摇晃均匀。（若是传代数量多，可以在⑥号步骤基础上继续操作：先平均在需传代数量的培养皿里预先加入部分的培养基，剩下少部分加入离心管吹匀细胞，再平均分到每个培养皿）。
⑧把传代好的培养皿放到显微镜下观察，是否成为单个的细胞个体，并且是否分布均匀，最后放入37℃恒温细胞培养箱。
⑨拿酒精喷洒操作台，用纸从里到外擦拭一遍，将所有东西归位，拉下玻璃罩，打开紫外线照射30min。
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