市面上销售的ELISA试剂盒种类繁多，不同指标的检测范围及实验方法不尽相同，甚至相同指标不同厂家的试剂盒实验方法都可能会不一样。但基本原理都是一致的，是将可溶性的抗原或抗体吸附到(C8H8)n等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。
每一个试剂盒里都会有对应的说明书，注意事项里大多都会提到“实验严格按照说明书的操作进行”。为什么要严格按照说明书操作？为了更完整的回答这个问题，需要先回顾一下ELISA各种方法的原理。


根据试剂的来源和标本的性状及检测的具体条件，可设计出不同类型的检测方法。大致分为以下几类：
1.双抗体夹心法测抗原;
2.双抗原夹心法测抗体;
3.竞争法测抗原;

4.间接法测抗体；

下面总结如果不按说明书操作可能会出现的不满意结果情况：
1.先说最严重的操作错误，看错或压根不看试剂盒配套说明书，不按操作步骤加样。比如把竞争法的试剂盒当作双抗体夹心法来做，导致的结果就是整板显示很强的蓝色，无任何梯度。
2.混用别的试剂盒里的试剂。不同厂家或者相同厂家的不同试剂盒，所含的试剂成分很可能是不一样的，混用导致的结果是，浪费珍贵的样本，样品的回收率达不到预期值，如果混用不同试剂盒的酶复合物，会导致显色过弱或过强，因为每种试剂盒所用酶复合物效价可能不一样。
3.不看文献或者不做预实验。比如某个试剂盒按照其灵敏度范围和文献报道推算样本应该1:10稀释，结果稀释成1:1000，导致的结果是显色过弱，结果不可用。
4.不校准移液器及培养箱的温度湿度。导致工作试剂浓度不准确，孵育温度不合适，实验带来误差。
5.洗涤不充分，每孔洗液加样过少，或者残留。导致的结果是显色过快，同时背景较高。
6.手洗板时所用枪头没有悬空加入洗液，导致洗液污染，整个实验失败。
7.剩余酶标板条未及时放入干燥袋，导致酶标板受潮，下一次再做时，显色过弱或污染，CV值过高。
8.试剂盒保存条件不当。试剂盒要求放4℃的，放在了-20℃。或者要求放-20℃的，放在了4℃。均会导致试剂盒敏感性下降。
以上只是最常见的操作错误。顺利完成一次ELISA实验需要注意的细节很多，许多操作环节都影响到检测的质量。
总之，收到elisa试剂盒，要真仔细研究说明书才行的。

ELISA试剂盒变质是ELISA实验中比较常见的问题，现总结影响ELISA试剂盒的变质：
 1、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。

 2、试剂因素
不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量完全yi致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件。严格执行这标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性；对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。

 3、样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等，后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。

 4、操作因素
ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。

 5、灰区的设置
通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有yi条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

 6、标本复查
ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

 7、常表示结果的常用方法
      a.定性测定。
      b.半定量测定 结果yi般以滴度表示。
      c.定量测定 即用已知量的标准品作yi系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每yi块反应板都必须绘