【笃玛实验科普-260007】WB实验小白必看！

WB实验小白必看！一图搞定全步骤~
你是不是也对着Western Blot实验步骤一头雾水？别慌！这张流程图帮你理清从“蛋白提取”到“条带曝光”的全过程👇

🔹 第一步：提取蛋白   选择合适的裂解液去裂解细胞/组织 → 低温+抑制剂保护

🔹 第二步：蛋白定量   BCA法或其他蛋白定量法检测蛋白浓度 → 充分变性

🔹 第三步：电泳分离   上样 → 跑胶（根据分子量大小分离）

👉 注意胶浓度、电压、避免产热过多

🔹 第四步：转膜   蛋白条带转印到PVDF/NC膜

💡 小贴士：膜要活化、无气泡、冰浴降温，转完用丽春红检查效率

🔹 第五步：封闭 + 抗体孵育   封闭非特异位点 → 一抗（4°C 过夜）→ 二抗（室温1-2h）

🧴 封闭液选牛奶或BSA，使用一抗和二抗前都要先洗洗洗！

🔹 第六步：曝光检测   加化学发光底物（ECL）→ 二抗上的酶激发荧光 → 曝光或成像仪采集条带

⚠️ ECL现配现用，控制曝光时间，保持膜湿润

❌ 出现非特异条带？优化抗体浓度或封闭条件吧～

保存这张图，实验再也不迷路🧠

@你身边正在苦战WB的小伙伴，一起变高手💪