一张图讲透qPCR!
做分子生物学的兄弟姐妹们,是不是看到qPCR就头大?
提取RNA、逆转录、跑qP……步骤多还容易出错?
今天分享一张超清晰的qPCR实验全流程图解!真的爱了爱了~😍
📌 实验四步走:
1️⃣ 提取RNA → 记得防RNase污染!用Trizol最稳
2️⃣ 逆转录 → 把RNA变成cDNA,这是关键一步
3️⃣ 上机运行 → 探针法更特异,染料法更便宜
4️⃣ 数据分析 → 用 2^(-ΔΔCt) 公式算相对表达量!
⚠️ 血泪注意事项(右侧):
• 引物Tm值最好在60-64℃哦!
• 染料法(如SYBR Green)一定要看熔解曲线,排除非特异性扩增!
• 基线和阈值设置别乱调~
• 所有操作都要防核酸酶污染!
🔍 底部还有探针法和染料法的原理对比图
把变性(95℃)→退火(60℃)→延伸(72℃)的循环过程拆解得明明白白
适合:考研党/研究生党/所有跟PCR死磕的科研人!
做实验前拿出来复习一遍!
祝大家的qPCR和WB都一次成功!💪
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