【笃玛实验科普-260004】ELISA实验三大"刺客"样本篇-异嗜性抗体

上期我们了解了乳糜血对ELISA实验结果的影响，今天来了解最后一个刺客-含异嗜性抗体血清样本。首先来了解异嗜性抗体是什么。异嗜性抗体可以说是人体免疫系统产生的“万能钥匙”，能非特异性结合多种抗原，IgG类天然抗体占大多数，也有IgE、IgM类。

那么异嗜性抗体是怎么产生的呢？我们从外源性的原因来分析，一共有3个点。第一，接触了动物蛋白，频繁地接触宠物猫狗、 农场动物、食用未煮熟的肉类，都可能会让人体接触到动物免疫球蛋白，进而诱导人体产生针对这类免疫球蛋白的抗体。第二，感染了某些细菌、病毒或接受过动物源性疫苗，人体也会产生此类抗体；第三个原因，接受过鼠源性单克隆抗体治疗的患者也极易出现异嗜性抗体。

异嗜性抗体是多克隆抗体，它通过同时结合捕获抗体和酶标抗体的恒定区（一般是Fc段），形成了假阳性复合物，捕获抗体通过疏水键固定在酶标板底部，假阳性复合物随之固定，洗涤也无法洗掉，这样就造成了最终结果的假阳性。这就是异嗜性抗体造成假阳性结果的基本原理。

那么，如何减小异嗜性抗体对结果的影响呢?这里就涉及到一个知识点，也就是抗体的结构，我们先来大概了解一下抗体结构。抗体是由B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化成的浆细胞产生的、可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白，由两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键连接而成地肽链分子，呈“Y”状。如图所示，抗体又分为可变区Fab和恒定区Fc。

在可变区某些区域，氨基酸组成、排列顺序和构型更易变化，称之为高变区HVR，也称互补决定区CDR，此区域是抗原-抗体特异性结合的区域。

那么使用像动物血清、非特异性IgG这样的阻断剂，就是将异嗜性抗体的高变区先占领，使其无法干扰检测抗体、酶标抗体对目标抗原的特异性结合，从而消除其干扰。在ELISA实验中，可以在样本稀释液中加入此类阻断剂。

我们知道，异嗜性抗体嗜通过结合其它抗体的Fc段来对实验结果产生影响，那我们是不是可以通过去除捕获抗体的Fc段来减少异嗜性抗体的干扰呢？答案是：当然可以！而且这是目前市面上也比较通用的创新性的方法。通过胃蛋白酶可以将Fc段溶解掉而不破坏Fab段的完整性，Fab段完整即代表着此抗体仍保留抗原-抗体特异性结合的功能，此方法抗原大幅减少异嗜性抗体结合的Fc段表位。

除了前面视频提到的两种针对试剂盒的改良方法，还有两种针对样本的处理方法。第一种，加入适量的PEG，将大分子的IgG等异嗜性抗体沉淀至底部，而小分子的抗原存在在上清中，这样的处理方法前提是抗原的分子量不能太大，要和异嗜性抗体有较大的分子量差。

最后，老办法，稀释样本，也可减轻异嗜性抗体的干扰，不过抗原的浓度也会随之降低，需要保证稀释后样本浓度要在试剂盒可检测范围内。

ELISA实验血清样本的三大刺客到此已全部介绍完毕，这里给大家做了一个简易版小总结，大家可以根据自己的需求自行截图保存哦。