鼎昊源(天津)生物科技有限公司

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干货分享：小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物

发布时间：2018-08-30 14:43 点击次数：

近期的组织研磨和样品处理分享、讨论，我们邀请到了实验动物监测所袁老师给大家分享，内容是——小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物，研磨使用的仪器是鼎昊源 TL2020 组织研磨仪。

那接下来，就让我们先睹为快，看看这个案例的情况。
 
实例 1：加裂解液直接匀浆（使用 Trizol 提取组织 RNA）

1、取适量组织装入离心管，组织尽量剪碎成小块；
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗（一次性使用）；
3、先加入 Trizol（不建议加入太多 Trizol，液体体积过大影响匀浆效果），盖好管盖，装入鼎昊源 TL2020 组织研磨仪适配器中，安装上机。
4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速，研磨时间为 2~5 min（不同组织研磨时间不同，脑 1 min，肝脏、脾脏和肾脏 2 min、肺脏比较难研磨需 3~5 min，可能更长，中间应停顿 1~2 次防止温度过高，研磨前最好先用液氮或放置在-80 度冰箱预冷）；
5、再加入适量 Trizol 至总体积；
6、后面步骤按 Trizol 说明进行。
 
实例 2：先匀浆，再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提，本 protocol 适用提取小鼠组织中的病毒的核酸

1、取适量组织装入离心管，组织尽量剪碎成小块，样品量较多时使用大离心管；
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗，使用大离心管时，可以将氧化锆珠数量增加；
3、加入适量的灭菌 PBS 或生理盐水，总体积为离心管单管体积的 1/3~1/2 为好，盖好管盖，装入鼎昊源 TL2020 组织研磨仪适配器中，安装上机（研磨前最好先用液氮或放置在-80 度冰箱预冷）。
4、TL2020 组织研磨仪研磨参数设置为一定转速，研磨时间为 1~5 min（不同组织研磨时间不同，脑 1 min，肝脏、脾脏和肾脏 2 min、肺脏比较难研磨需 3~5 min，可能更长，中间应停顿 1~2 次防止温度过高），若研磨不充分，可以继续研磨到充分为止；
5、一定温度、转速，离心数分钟；
6、取上清液按照试剂盒说明书进行后续提取步骤。

实验 1 中，我们之前试过一齐加 1 ml 的 Trizol，可能是体积过大，反而匀浆效果不好，所以就改成先加一部分裂解先匀浆，然后再补齐 1 ml 体积。
 
嘉宾：实验 1 中，我们之前试过一齐加 1 ml 的 Trizol，可能是体积过大，反而匀浆效果不好，所以就改成先加一部分裂解先匀浆，然后再补齐 1 ml 体积。

昊诺斯嘉宾：如果前面匀浆充分了，后面补齐裂解后不需要再研磨的，只需稍微混匀就可以。
 
用户：可以选择干磨吗？就组织直接扔进去弄成匀浆或者粉末，我再根据需要加 trizol 或者蛋白裂解液
 
嘉宾：跟大家分享下，我们最近用组织研磨仪用于抗原加佐剂的乳化，效果还不错。一机两用。
 
嘉宾：组织干磨效果不好，需要加入适量的液体，没有液体很多组织挂在壁上。
 
用户：提取下的核酸用途是什么？这个是我最关心的。
 
嘉宾：我们用于病原微生物检测。
 
用户：怎么个检测法您能给我简单介绍一下吗？
 
嘉宾：所以我们用的最多的是实验 2，先匀浆，破碎组织，释放组织细胞中的病毒，。
 
嘉宾：主要采用 PCR 为基础的分子生物学检测。
 
用户：嗯，PCR，我知道了，谢谢。
 
嘉宾：不客气。一般的组织核酸抽提试剂盒中，都会有一部匀浆的步骤。
 
嘉宾：以前没有研磨仪的时候都是用研钵手工匀浆，一天几十上百个样品，累成狗。
 
用户：研磨如果用液氮处理，里面的液体不会冻住吗？
 
用户：我也有这个疑问，看来这个仪器是核酸分析必须的。
 
嘉宾：开始会冻住，等研磨到一定时间就自然解冻了，我们处理时只是让它预冷一下，最好不要冻住。所以一般是放在-80 度冰箱稍预冷一下就可以了
 
用户：嗯！
 
用户：谢谢
 
嘉宾：是的，核酸检测必备。
 
用户：早些天我看一个打沙棘的视频，冻掉以后，直接就打下来了，所以冷冻还是有效果的，原理是一样的。
 
嘉宾：还要讲一下，选质量好的 EP 管，现在一些国产的 EP 管质量太差，盖不严，导致液体漏出。如果预冷的话，一些 EP 管就可能被打碎了，我们有过这样的例子。
 
用户：我们也因为质量不好的 EP 管影响过实验，所以试剂耗材也很重要。
 
嘉宾：同意。
 
用户：一定要选择质量有保证的产品。
 
嘉宾：是啊。关于振动频率说明一下，我们选的频率比较高，我看到有的资料上讲一般动物样品如大脑、心脏、肺、胃、肝脏等无骨骼组织的研磨推荐频率是 1000-1100r/min 研磨时间是 1-2 min，具体的频率可根据样品材料及数量的不同，做适当的调整。过大的频率或者时间都可能会导致部分 DNA 的断裂，建议每次研磨时间在 1 mm 左右，中间停顿一会，重复 2-3 次。
 
用户：谢谢袁老师。