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实验室「标配」拟南芥研磨提取核酸引发的讨论

发布时间：2018-04-11 10:50 点击次数：

给大家分享的内容是——拟南芥研磨提取核酸。

那接下来，就让我们先睹为快，看看这个案例的情况。
 
实验：拟南芥研磨提取核酸
 
实验地点：某大学
 
实验样品：拟南芥

实验仪器：鼎昊源 TL2020 高通量组织研磨仪
 
实验步骤：
1、在 2ml 圆底离心管底放入拟南芥样品，每管样品量不超过单管体积的 1/3；
 
2、在离心管中加入 3mm 硬质不锈钢研磨珠 2 颗；
 
3、接下来的步骤根据提取目的不同操作略有不同，以表格形式展现如下：
 
 
此外，以下我们邀请了提供此案例的嘉宾老师和一些用户朋友进行了分享和讨论。
 
嘉宾：大家好，之前跟大家分享过几期多是动物组织，这次我们分享一次植物组织的案例。植物组织的特点是一般样品量比较大，老师们多会采用 2ml 的离心管，每次用适配器的话就是 2mlx2X56 的研磨量，基本都可以满足实验的需求了。
 
嘉宾：之所以想跟大家分享这次的案例，是因为这位老师采用的组织研磨仪研磨方式比较系统全面一些，用组织研磨仪湿磨和冷冻研磨都有。湿磨他通常是在提取 DNA 的时候使用，冷冻研磨多用于提取 RNA，不知道群里各位老师是否也是采用类似的研磨方式。
 
嘉宾：在这个案例中，我们看到样品是拟南芥，像其他的叶片类组织，比如黄瓜、苜蓿、水稻等，都可以采用同样的设置进行研磨。
 
用户：DNA 和 rna 的提取条件有什么区别？
 
嘉宾：RNA 的话我们知道比较会容易降解，所以会需要浸泡液氮，以及将用具进行灭菌，而且尽可能在保证快速短时间的研磨条件下进行。
 
用户：做过生菜。
 
嘉宾：您可以跟我们分享下您提生菜叶片的条件吗？是提取 RNA 还是 DNA 呢？
 
用户：液氮手工磨，DNA。上学时，全是手工配，累死。
 
嘉宾：还好生菜应该是属于容易研磨的类型吧。
 
用户：玻璃研磨器都没法用，只能陶瓷的，玻璃直接炸。
 
嘉宾：您可以用一用我们的组织研磨仪。
 
用户：现在不做了。
 
嘉宾：提 DNA 的话用自动组织研磨仪就可以湿磨，也方便后期离心，不用担心转移带来的污染了。不做了就解放双手了。
 
嘉宾：一般来说，如果是较有任性的植物组织，比如水稻茎等，对样品的进入量大小要求会略严格。
 
用户：抽提液离心管还不能用灭菌的。
 
用户：禾本科的植物相对难磨。
 
嘉宾：如果能尽量将样品本身剪成 1cm 长左右的小段会对研磨有大帮助。
 
用户：恩，所以用液氮。
 
嘉宾：是的，您是不是做过类似的植物样本？
 
用户：对，我们实验室只做植物样品。
 
嘉宾：如果是研磨刚说的韧性含纤维的植物样本，除了刚老师说的用液氮，也可以同时采用 1 大 1 小的钢珠来研磨。
 
嘉宾：那您这边经验应该比较丰富的，您一般做的都有哪些样品呢？
 
用户：我们这一般的植物样品都有，豆类，玉米，油菜牧草类。
 
嘉宾：样品种类确实很多啊。
 
用户：我们是植物实验室。
 
嘉宾：一般来说，您觉得哪种比较难磨呢？
 
用户：我们好多样品是直接研磨种子，豆类、油菜、苜蓿种子不好磨。
 
用户：组织研磨仪研磨珠用的什么材质的？
 
用户：我们的组织研磨仪用的是莱驰的 mm400，用的是大的不锈钢珠。
 
嘉宾：用的是不锈钢的，3mm 的钢珠。
 
用户：拟南芥是什么东东？
 
嘉宾：实验用的拟南芥看着还挺可爱的，长在培养皿里，小小的一整片。
 
用户：植物研究的模式植物。
 
用户：我还以为是药材呢。
 
嘉宾：种子的话，用组织研磨仪您一般会间歇多次研磨吗？还是说一次性研磨几分钟？
 
用户：玉米及其他相对容易磨的，一次性一分钟基本没问题，豆类和苜蓿种子一般两三次，但一定先要液氮处理过。
 
嘉宾：是的，种子和我之前说的水稻茎这种一定要液氮过才能出研磨效果。
 
用户：这就是拟南芥。
用户供图
 
嘉宾：谢谢史老师，拟南芥植物中的果蝇。对于难研磨的样品，我们有时也会采用之前说的大钢珠配小钢珠的研磨方法，大钢珠可以把大块打成小块，小钢珠再通过不停的撞击把样品研细。
 
用户：属于标准物质，具有代表性或者把复杂物质简单化。样品的提取效率怎么样？
 
嘉宾：样品的提取效率是有保证的，之前也有过案例分享是和手研磨的进行比对，效果是比较突出的，一般老师提取之后会跑一个电泳，看胶图的效果，之后在进行具体的检测和下一步工作。上次分享的案例是做药物代谢分析的，结果也是让老师满意的。
 
嘉宾：样品的自动研磨效果确实对后续提取核酸、蛋白，酶，以及其他成分分析类实验是很有帮助的
 
用户：嗯，非常好。
 
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