T和AKT其实只差一些磷酸基,分子量稍大点,以前听别人讲P-AKT和AKT之间有shift,有时候WB是可以做出来的。用的是梯度胶?分子量在68KD左右。应该怎么样来配胶呢?梯度胶的浓度?谢谢!prince1101 点击次数: 5895 发表于:2015-08-21 11:46 来源:丁香园论坛 |
wb教程系列(一):样品制备视频本视频来自Youtube 点击次数: 13711 发表于:2014-11-07 11:57 来源:丁香园 |
4kb,分子量约52kD,转染293T细胞能见荧光,WB杂不出来,设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag,仍然杂不出来WB。仔细检查过序列,不存在移码的问题,非常费解。有 点击次数: 3758 发表于:2015-08-21 11:45 来源:丁香园论坛 |
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法,然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做!这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时,磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时 点击次数: 2880 发表于:2019-01-28 14:57 来源:丁香园 |
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法,然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做!这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时,磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时 点击次数: 16683 发表于:2018-05-31 15:23 来源:&英文特</a&> |
在 WB 和 IP 实验中,破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织(如脑组织),在准备 WB 或 IP 的样品时,紧密的纤维组织(如肌肉组织)需要更剧烈的方法;对于培养的原代细胞或细胞系,在准备 点击次数: 6711 发表于:2016-05-10 08:42 来源:&CST</a&> |
抗体孵育——WB真正的难点:抗体的使用是一种艺术,一种抗体一个脾气。对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。无论你如何提高自己的转膜技术,高效和低效之间往往只有数倍的差异,而 点击次数: 43340 发表于:2014-10-29 12:12 来源:&丁香园</a&> |
起,这其中WB走的弯路最多,现在就和大家聊聊我个人的历程,并交流一下自己的经验。这个经验是我跑一个11KD分子量分泌性蛋白得出的,肯定不会适用于所有情况,但是论坛里面受困于小分子量蛋白WB的朋友还是很 点击次数: 44345 发表于:2019-05-27 10:38 来源:丁香园论坛 |
通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及DNA片段化。WB是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是WB也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用WB做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关 点击次数: 8999 发表于:2018-07-02 09:04 来源:英文特 |
为核浓缩,起皱,膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是 WB 也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方 点击次数: 5240 发表于:2019-01-29 14:17 来源:丁香园 |
达的蛋白,且在各组织和细胞中的表达相对恒定,可作为 WB 技术分析蛋白水平的标准化参考。为什么要使用内参?在 WB 开始之前,常使用生物化学测定法(例如 Bradford,BCA 等)测定样品中的蛋白 点击次数: 6960 发表于:2020-11-11 17:53 来源: |
可通过融合部分的抗体检测。WB 实验中常会出现各种问题,迪申生物技术(上海)有限公司专注于生产免疫组化相关产品多年,对 WB 实验有一定了解,今天跟各位同学一起分享下 WB 实验中各种问题及应用对策。 点击次数: 98141 发表于:2015-12-25 16:06 来源:&迪申生物</a&> |
Stirpping:完整的WB流程结束后,可能需要重新标记某些膜,这时候就“可能”需要对膜stripping。这里用了“可能”二字,即不一定必须,那么首先讨论一下stripping的必要性。Strip 点击次数: 12472 发表于:2014-11-06 17:43 来源:丁香园 |
做了很久的 WB(western blot),走了很多弯路,其实发现 WB 想要做好并不难,总结了 WB 实验中可能会遇到的问题,分析了可能的原因及对应的解决方案,希望能成为你实验成功的基石。问题 1:转膜不充分(1) 点击次数: 12611 发表于:2016-05-25 18:09 来源:生物学霸 |
蛋白质免疫印迹蛋白质免疫印迹(Western Blot,简称 WB)可以:1. 从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;2. 定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;3. 用于蛋白质 - 蛋白质、蛋白质 - 点击次数: 17373 发表于:2018-12-19 09:50 来源:丁香园 |
首先,摆摆自己的经验。鄙人做WB有8、9年了,平均下来两天跑一张多的蛋白胶;文章嘛,凑数的单篇有上24+,一作单篇15+(系国内完成;注:当年的IF,现在逐年递减没个标准)。其次,由于一些机缘的因素,在实验室WB体系完善 点击次数: 7465 发表于:2013-08-19 16:58 来源:互联网 |
师妹的秀发,深情的说到:妹妹,给你安利一款软件,轻松搞定 WB 结果表达差异。好了,下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果 ... 点击次数: 11314 发表于:2019-01-03 10:11 来源:&丁香园</a&> |
师妹的秀发,深情的说到:妹妹,给你安利一款软件,轻松搞定 WB 结果表达差异。好了,下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果 ... 点击次数: 3530 发表于:2019-02-15 14:34 来源:丁香园 |
以用于做STAT3的wb吗?还是需要专门提取核蛋白?多谢!顺便再问一句,stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达?wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白!zfyyzz00 点击次数: 5083 发表于:2015-08-21 11:38 来源:丁香园论坛 |
毛毛虫0118 我想用人血标本做WB,请问血标本最多可以放多久啊?还有做WB的话,要收集大概多少毫升血就可以了呢?毛毛虫0118 为什么没有人回复我啊?volano 建议你还是自己摸索一个量首先,不知 点击次数: 6323 发表于:2015-08-21 11:45 来源:丁香园论坛 |