关键词: 植物蛋白含量测定 LoWry法
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2.标准曲线的绘制
(1)取7支试管,编号后,分别加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准蛋白质溶液,用蒸馏水补足1ml,使每管含蛋白量分别为0μg、25μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg(必要时可做重复)。
(2)在每支试管中用定量加样器加入5ml甲液,混匀,于30℃下放置10min。
(3)在每支试管中喷射加入0.5ml乙液,立即振荡混匀,在30℃下保温30min。
(4)准确到30min后,以不加标准蛋白试管中的溶液为空白,在500nM下用1cm光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色,测定光密度值。
以蛋白浓度为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。
3.样品的测定
(1)样品的提取:称取鲜样0.5g,用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。
取1.0ml(视蛋白质含量适当稀释)样液加入试管中,然后重复步骤2的(2)、(3)、(4),以标准曲线中的0管为空白,测定吸光值。
(2)根据吸光值查标准曲线,求出比色液中的蛋白质含量。
4.结果计算
样品中蛋白的含量(mg/g)=C×VTV1×FW×1000
式中C:查标准曲线值(μg);VT:提取液总体积(ml);FW:样品鲜重(g);V1:测定时加样量(ml)。
五、注意
还原物质,其他酚类物质及柠檬酸对此反应有干扰。
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