4.适用范围广。试剂盒可用于检测细胞裂解蛋白或细胞上清。
可以检测涵盖95%污染细胞培养的8种支原体。包括:
M. hyorhinis
M. arginini
M. fermentans
M. orale
M. pirum
M. hominis
M. salivarium
A. laidlawii
三.MycoProbe®试剂盒的详细介绍
1. 试剂盒成分:
细胞裂解液 ,Cell Lysis Buffer
杂交板96孔板, Hybridization Plate
链亲和素捕获板96孔板, Streptavidin Capture Plate
样品稀释液 ,Sample Diluents
碱性磷酸酶标记的抗地高辛检测抗体 ,Anti-digoxigenin conjugated to alkaline phosphatase
捕获探针,Capture Probes
检测探针,Detection Probes
阳性对照 ,Synthetic DNA Oligonucleotide Positive Control
洗脱液,Wash Buffer
底物及其稀释液,Substrate(NADPH)
信号放大酶及其稀释液,Amplifier enzymes
终止液 ,Stop Solution
浮漂 ,Float Collar
板封口条 ,Plate Sealers
使用说明书 ,Protocol Manual
(具体试剂盒组分详见英文说明书,产品说明书:http://www.rndsystems.com/pdf/CUL001B.pdf)
2.试剂的储存
未开封的试剂盒可以储存2 - 8° C;请在有效期内使用。
开封后的试剂盒后试剂分别保存,详见英文说明书。
3.其他实验需要的准备
酶标仪
移液器和枪头
去离子水,无RNA酶
100 mL 和 1000 mL量筒
水平微孔板摇床
涡轮混合器
手套和面具
4. 主要的实验操作流程
A.细胞裂解或细胞上清液准备。若为细胞,终浓度达到1.25x106cells/mL;若为细胞上清,10倍稀释。
B. 预先润洗杂交板。
C. 将“探针”加入杂交板微孔中。
D.将样品、阳性对照、阴性对照加入微孔中,65℃水浴60分钟“杂交”后在洗脱。
E. 预先润洗带有链亲和素的板。
F. 将标记好的样本加入带有链亲和素板的微孔中,室温孵育60分钟进行“捕获”。
G.加入碱性磷酸酶标记的抗地高辛的检测抗体,室温孵育60分钟进行“检测”。
H. 加入信号放大酶,进行信号放大或者扩增。
I.加入底物孵育30分钟。
J. 加入终止液,在490nm显色。
5.实验结果参照
①样品的阳性结果的OD值应≥1.5,可以以下表做比对。
②检测的样本应达到一定检测量,下表为最低可检测量。
6.相关文献 REFERENCES
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17. Hatanaka, M. et al. (1975) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72:1401.
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