关键词: PCR 阳性 标准
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一、条带宽不超过1mm,边缘整齐;
二、条带在期望的碱基大小之内;
三、背景上无smears,也无引物二聚体的出现则是PCR扩增失败,而非阴性反应;
四、如果出现期望的碱基大小之外的其它条带,不管是否有期望大小的条带,均应作为人工假像看待;
五、在临床标本检测时,尤其对于肿瘤标本,除预期条带外,经常有以外条带或smear现象,但只要其亮度明显低于目的条带,也应视为阳性;
六、对于某些情况,尤其在自己设计引物时,如果经费允许,还是应该抽样测序验证。因为用一对引物扩出同一家族不同成员的情况也是有的,如果恰巧这些成员长度相等,则用上述原则无法判别。
比如当我在扩MAGEs基因时,曾经一对引物扩出其家族的6个成员,产物均是1000bp左右。实际是MAGE1-6,要是你的原则,那都是MAGE3了。还有我曾用一对引物扩出小鼠,大鼠,兔,人,豚鼠的IgG 1Fc产物均为750bp;
七、阴性反应我理解为:由于模板的不存在而使PCR扩增失败。所以是否阴性反应还应和阴性对照相比较。阴性反应没有二聚体和Smaer现象情况并不少见;当然最常见的情况还是二聚体和Smear现象(我们这称为“大马路”);
八、条带整齐就可以了,1mm的标准无法实施,条带越小,胶越稀,跑得越远,带越宽。做这些试验,往往是研究生,新手上路,不必要求太严格了。
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电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?
电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?不会没成功吧?
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双非博士真就如大家所说没有出路?
双非博士一枚,在老师的指导下,自己也算勤奋,发了三四篇SCI,其中有一篇顶刊,手头上还有一些工作没有处理完,本来心里有些自卑,面对现在外界所说双非博士的各种言论,导致自己有些不知所措。以后进高校,哪怕你有好文章也是会四处碰壁嘛?想问问过来人的经验。
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PCR有产物但是电泳无结果
PCR后用紫外分光测定DNA含量都在450-500ug/ul,但电泳无目的片段的条带,内参也没条带。电泳中maker能跑出条带,用引物也点了样,引物的条带稍模糊但还是有,请问是哪里出了问题?
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