核糖核酸酶保护实验相较于Northern的优势与问题分析
核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay,RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交,标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合,形成双链RNA;未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双 ...
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S1分析酵母基因寡核苷酸探针
一、操作步骤1. 在0.5 mL Eppendorf管中混合以下:10-20 ug 酵母RNA10ul杂交组合加水,使终体积25 ul40ul矿物油在100度加热反应2分钟,转移到55度过夜(12-16小时)杂交(的准确温度将取决于寡核苷酸的长度和组成)。2. 培养过夜后,旋管和1.5 ml 离心 ...
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