关键词: RNA的提取 cDNA合成
来源: 互联网
5846 阅读
第一节 植物病毒RNA 提取
大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。
一、材料
提纯TMV病毒液(10mg/ml)。
二、设备
冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。
三、试剂
TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA 酶的双菌水。
四、操作步骤
1、取一eppendorf管加入提纯TMV(10mg/ml)400ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12000g离心10分钟。
2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
3、吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12000g离心10分钟。
4、取水相,加入1/10倍体积的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀,-20℃30分钟。
5、4℃下12000g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀,4℃下12000g离心5分钟。
6、小心弃去上清液,沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟,并溶于无RNA 酶的双菌水或TE缓冲液中。
7、取10ml进行电泳分析,另10ml用于cDNA合成。
[注意]
1、整个操作应尽可能在低温下进行。
2、由于病毒RNA 镶嵌于外壳蛋白里面,因此要充分剥去病毒外壳蛋白,一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
19 评论
siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
3 评论
最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
2 × Frag/Prime Buffer RNA片段化/一链cDNA合成
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
钻石会员 入驻 17 年
M5 miRNA cDNA Synthesis Kit 小RNA第一链合成试剂盒
北京孚博生物科技有限公司
金牌会员 入驻 8 年
高保真性的RT-PCR合成cDNA试剂盒(长链RNA及富含GC序列的RNA)
上海百赛生物技术股份有限公司
钻石会员 入驻 14 年
M5 miRNA cDNA Synthesis Kit 小RNA第一链合成试剂盒(加尾法)
北京兰博康斯科技有限公司
金牌会员 入驻 16 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号