土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒-紫外分光光度法【BC0100】实验操作视频

S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。 H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。

溶液的配制： 1. 试剂一：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需将EP管先离心。临用前取0.05mL试剂一加入9.95mL蒸馏水稀释待用或者按比例配制。用不完的试剂2 - 8℃保存1周。 2. 试剂二：临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂2 - 8℃保存4周。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30 - 50 目筛。 二、测定步骤 1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 240nm，用蒸馏水调零。 2.加样（1.5ml EP 管）： 测定管：加入 0.1g 风干土样、1000μL 试剂一。 无基质管：加入 0.1g 风干土样、1000μL 蒸馏水。 无土管：加入 1000μL 试剂一。 于 25℃振荡培养 20min。 之后，在测定管、无基质管、无土管中均加入 25μL 试剂二，混匀后，以 8000g 的转速在 25℃离心 5min，取全部上清。 向上清中加入 120μL 试剂三，混匀，在 240nm 处记录各管吸光值 A 。（每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做 1 - 2 管 ）。 三、S - CAT 活力的计算 单位定义：每天每 g 风干土样催化 1mmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。 计算公式：S - CAT（U/g 土样） =[(A 无土管 - A 测定管 + A 无基质管)×V 反总 ÷(ε×d)×10³]÷W÷T =18.9×（A 无土管 - A 测定管 + A 无基质管） 。 其中，V 反总为反应体系总体积（1.145×10⁻³L ），ε 为过氧化氢摩尔消光系数（43.6 L/mol/cm ），d 为 1mL 石英比色皿光径（1cm ），T 为反应时间（20min = 1/72d ），W 为样本质量（0.1g ）。

如果吸取的上清仍有部分浑浊，可以在加入试剂三后统一再一次进行离心。