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biorbyt
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突破极限的多靶点检测:
多重免疫荧光TSA技术
传统免疫荧光的局限性:
1.依赖抗体直接标记荧光素;
2.信号强度受限于抗体浓度;
3.多靶标检测时易受荧光通道
重叠干扰(即光谱串色);
4.抗体种属限制导致多重标记困难。
多重荧光免疫组化-TSA技术是指基于酪胺信号放大(Tyramide signal amplification)技术,利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应,使荧光素在抗原-抗体结合位点与抗原蛋白残基结合,形成荧光素沉积的放大信号,实现在同一组织切片上多个靶标蛋白共同染色。

首先对样本切片进行常规的抗原修复和双氧水处理,以及非特异性抗原封闭,然后孵育一抗,一抗与组织切片抗原特异性结合,接着孵育HRP标记的二抗,二抗与一抗结合反应,接着加入TSA荧光燃料反应,荧光标记的酪胺分子被二抗标记的HRP催化激活,产生酶促反应,使荧光素在抗原抗体结合位置形成大量的荧光素沉积,实现信号放大。可通过热处理洗脱一抗和二抗并但同时保留与组织抗原共价结合的荧光素,最后进行切片核染封片就可以观察实验结果了,如果是选择组织芯片和自动化切片扫描仪器,最多可以实现几十个组织样本和抗原的检测分析。

相比传统的免疫荧光技术,TSA技术灵敏度更高,多重检测能力更强大,对多种靶标检测不要求种属来源不同的抗体,对样本兼容性也更高!
英国biorbyt可以提供多种TSA技术产品,欢迎咨询或者登录网站查询。


