重点实验室 辽宁省实验动物模型重点实验室是辽宁省科技厅2013年设置的省重点实验室,经过多年的建设,已建成集模式生物研发、生产和动物实验服务三位一体的综合性服务平台。提供常规转基因、常规基因敲除、条件型基因敲除和基于CAS9技术的基因编辑小鼠、仓鼠等临床模式动物制备服务以及动物代繁代养服务等。
基因修饰动物模型
1、转基因制作
转基因是将外源DNA通过显微注射的方法注射到小鼠受精卵的原核内,注射DNA整合到受精卵的基因组中,并遗传给后代。
2、基因敲除(KO)
用大小鼠基因特异sgRNA(single-guide RNA)介导Cas9核酸酶切割DNA出现特定的DSBs( double-stranded breaks),通过NHEJ(nonhomologous end joining)修复途径造成靶基因的Indel ( insertion/deletion),产生移码突变(frameshift mutations)、翻译提前终止(premature stop codon)或者片段删除,从而实现基因敲除。成功率高达100%,且不受品系限制,可以实现多基因同时敲除。
3. 基因敲入(KI)
(1) 特定位点寡核苷酸突变 在小鼠基因组中的特定位点敲入突变,包括单个或多个碱基突变、单个或多个氨基酸突变等。 (2) 特定位点基因敲入 在小鼠基因组中的特定位点敲入异源基因,如:荧光蛋白,LacZ,Luciferase,CreERT2,LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP等。
4. 条件性基因敲除(CKO)
条件性基因敲除是通过Cre-LoxP/FLP-Frt重组系统来实现的。在目的基因两端各放置一个LoxP序列,得到Floxed小鼠。将Floxed小鼠与Cre小鼠交配,即可获得目的小鼠。
5. 诱导性点突变制作
利用Cre重组酶介导的删除和倒位,可以实现目的基因的诱导性点突变。
动物模型
模型制备
干细胞及免疫细胞
间充质干细胞分离、鉴定、培养、分化及各种疾病研究
免疫细胞分离、诱导培养、鉴定及各种疾病研究
细胞功能学
细胞活性检测、细胞增殖检测、细胞凋亡检测、细胞周期检测、细胞自噬检测、细胞坏死检测、细胞焦亡检测、细胞铁死亡检测、细胞迁移能力检测、细胞划痕检测、细胞黏附能力检测、细胞侵袭能力检测、细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光染色、细胞RNAscope实验、细胞线粒体自噬检测、细胞内质网应激检测、细胞荧光原位杂交(FISH)实验。
分子生物学
DNA提取、DNA甲基化、基因多态性检测、转录因子功能及调控 RNA提取、RNA甲基化、lncRNA表达及调控、circRNA表达及调控、miRNA加尾法PCR、miRNA茎环法PCR 载体构建、病毒制备、双荧光素酶实验、EMSA实验、RNA pull-down、RNA免疫共沉淀(RIP)、染色质免疫共沉淀(CHIP) 蛋白提取、蛋白修饰检测、蛋白活性分析、免疫共沉淀 Western 杂交、Southern 杂交、Northern 杂交、定量RT-PCR检测
病理形态
普通病理:脱钙与软化、标本包埋、切片、HE染色、特殊染色 分子病理:免疫组化、免疫荧光、TUNEL、原位杂交 病理图像:切片扫描、共聚焦、拍照分析、三维重建、AI病理分析 超微病理:透射电镜、扫描电镜能谱、电镜分析、免疫电镜
多组学研究
高通量测序 蛋白质组 代谢组
磁纳米粒子及精密磁检测技术
磁粒子成像
免洗型磁标记免疫分析 |