Pala | 精准分选，高效克隆

2024-08-14 16:44点击次数：443

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在单克隆细胞的分离及扩增中，稳定的将单个细胞分配到组织培养板中具有重要的意义。传统细胞株构建流程中，大多采用手动有限稀释的方法制备单克隆。然而，该方法的本质遵循泊松分布，极大限制了其铺板效率，导致工作效率极大的浪费。单细胞柔性分选系统Pala能够快速且稳定的分离单个细胞，在减少人工依赖的同时，＜2 psi的鞘液压力有效保持分离过程中细胞的完整性。

接下来对单细胞柔性分选系统Pala与有限稀释法的铺板效率进行对比。尽管最终结果会受诸如细胞类型及细胞处理方法等不同因素所影响，本次测试结果仍然具有非常强的代表性。

Pala | 精准分选，高效克隆

1、操作方法

1. 首先调整Pala至单细胞分配模式，将荧光校准微球（Spherotech）分配至96孔板中。

2. 利用细胞培养基制备半悬浮CHO单细胞悬液，通过35微米细胞筛网（E&K Scientific）除去结团细胞。明场显微镜下检测确保单细胞悬液具有较高的品质（无细胞团块及二聚体）。

3. 利用具有膜通透性的活细胞染料Calcein AM（Thermo Fisher Scientific）染色。染色后的细胞被分离至96孔板中，方式等同于荧光校准微球。

4. 校准微球及荧光染色CHO细胞均用FITC (533 nm)检测器作为激发器识别细胞。

5. 作为对照将同样的CHO细胞通过手动有限稀释的方法分配至96孔板中。

6. 每种条件下均用3台独立单细胞柔性分选系统在7天收集7块独立的孔板进行测试。铺板后利用明场显微镜下对96孔板每孔进行检测，分别计算单个细胞、二聚体以及空白孔的铺板效率。

2、实验结果

使用单细胞柔性分选系统Pala，校准微球平均铺板效率为：单个细胞93%，二聚体2%，空白5%；CHO细胞：平均铺板效率为单个细胞85%，二聚体5%，空白10%。手动有限稀释的效率为单个细胞32%，二聚体29%，空白39% 。所有孔板中， Pala分离CHO细胞的的最高铺板效率为92%。在3种条件下，手动有限稀释法实验的重复性是最差的。相比于有限稀释，单细胞柔性分选系统Pala极大提高铺板效率，同时又可在几分钟之内分选数块孔板，进一步节省时间，精力及耗材。