HaCaT细胞是人类永生化表皮细胞,由角质形成细胞培育而来的,保留了角质形成细胞分化能力,是非肿瘤来源的人正常皮肤永生化角质形成细胞株,与正常人角质形成细胞分化特性相似,可以繁殖150代以上,但不是肿瘤细胞,不具有肿瘤特性。
该细胞较难消化,胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红(abs47014938)消化5min作用,有时可能高达10min,主要由于细胞不同分化程度和融合度而异。注意消化前一定要用PBS清洗细胞2-3次,铺板时一定要均匀,因为HaCat成片生长,铺板不匀会存在局部生长过密难以消化,生长稀疏部分容易消化过度的情况。
图a低Ca2+条件下HaCat细胞基础状态和图b高Ca2+条件下HaCat细胞分化状态
10%FBS培养体系中的 Ca2+足以诱导该细胞分化,也就是说,正常培养体系下,该细胞会逐渐分化,分化前细胞近纺锤形,排列较松散,分化后细胞向立方体发展,排列紧密,呈片状生长。
低钙离子条件下,HaCat增殖更快,K14的表达仅限于表皮基底层,而K10和总合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通过免疫荧光实验证实了HaCat细胞分化表型的获得,与第6天相比,分化标记K10在HaCaT细胞中的表达在第14天显著增加,几乎100%的细胞是阳性的,这可能和细胞密度有关。 牛脑垂体物常用作无血清细胞培养的生长补充剂,可促进上皮细胞、内皮细胞和黑色素细胞增殖,广泛用作各种上皮细胞和黑色素细胞培养中的补充剂。此外,其具有抗氧化能力,可对抗过氧化氢诱导的细胞坏死,蛋白质氧化,膜破碎和DNA损伤。
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