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GB-direct微生物直接PCR试剂盒

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  • ¥450 - 1600
  • GBI
  • GB4400-50/100
  • 2025年07月14日
    • 详细信息
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    • 技术资料
    • 保质期

      一年

    • 库存

      大量

    • 供应商

      神洲基因

    • 保存条件

      -20C

    • 规格

      50反应-200反应

    GBdirect 微生物直接PCR试剂盒可直接萃取并扩增细菌、病毒等微生物基因组DNA。细菌、病毒样本经过GBdirect试剂处理后可直接用作PCR反应的模板,无需使用纯化的微生物基因组DNA,从而有效地避免了因样品纯化而可能产生的交叉污染。该试剂盒适用于对临床类病菌及食源性病菌的快速检测等。GBdirect 微生物直接PCR试剂盒由Lysis Buffer A、Lysis Buffer B、2x PCR Premix 、HiFi DNA聚合酶和分子螯合剂所组成。

    产品信息:

    货号 试剂盒组分 包装 保存
    GB4400-050 微生物Lysis Buffer A 10 ml -20℃
    微生物Lysis Buffer B 1 ml -20℃
    2x PCR Premix 0.65 ml -20℃
    HiFi DNA聚合酶 0.1 ml -20℃
    分子螯合剂 0.5 ml 4℃
    GB4400-100 微生物Lysis Buffer A 20 ml -20℃
    微生物Lysis Buffer B 2 ml -20℃
    2x PCR Premix 1.3 ml -20℃
    HiFi DNA聚合酶 0.2 ml -20℃
    分子螯合剂 1 ml 4℃
    GB4400-200 微生物Lysis Buffer A 40 ml -20℃
    微生物Lysis Buffer B 4 ml -20℃
    2x PCR Premix 2.6 ml -20℃
    HiFi DNA聚合酶 0.4 ml -20℃
    分子螯合剂 2 ml 4℃

    存储条件:分子螯合剂4℃保存,其它试剂保存于-20℃,应避免反复冻融。有效期6个月,


    特色:
    1.简单快速: DNA释放仅需10 min 左右。
    2.无需提取其DNA:节省时间,成本,劳动。
    3.易于自动化:与高通量的基因的工作流程兼容。
    4.多重PCR: 可以使用多重PCR 引物,扩增多个DNA序列。
    5.缩短实验时间,降低基因检测成本。



    操作流程图:






    操作流程:

    (一) 实验步骤

    分子螯合剂使用前一定要充分悬浮、摇匀。
    将微生物Lysis Buffer A 和 Lysis Buffer B 按 10:1 的比例混合,涡旋均匀。

    A. 含病菌的血液样本:
    1. 取50 μl含病菌的血液于一个1.5ml无菌管中,加入100 μl 微生物Lysis Buffer AB和10 μl分子螯合剂,涡旋均匀。

    2. 95℃水浴 10分钟。

    3. 9,000 rpm离心1分钟,上清液即可作为PCR反应的DNA模板。







    B. 口腔拭子、鼻咽拭子或肛门拭子等采集的菌体样本:

    1. 在一个1.5ml无菌管中加入200 μl微生物Lysis Buffer AB,将拭子头直接浸入裂解液中,并与管壁反复挤压几下,使样本尽量多地留在裂解液中,弃去拭子。

    2. 加入10 μl分子螯合剂,涡旋均匀。 95℃水浴 10分钟。

    3. 9,000 rpm离心1分钟,上清液即可作为PCR反应的DNA模板。
    C. 来源于食品的菌体样本:

    1. 将含有菌体的食品放入无菌容器中,加入5--10倍样本体积的培养液,捣碎食物样本,随后37℃摇床培养6--12个小时。

    2. 将50 μl上述培养液转移至一个1.5ml无菌管中,加入100 μl 微生物Lysis Buffer AB和10 μl分子螯合剂,涡旋均匀。

    3. 95℃水浴 10分钟。

    4. 9,000 rpm离心1分钟,上清液即可作为PCR反应的DNA模板。
    (二) PCR反应设置


    表一:PCR反应设置

    PCR反应成分 25 μl体系
    DNA 模板(μl) 5 - 7
    2x PCR Premix(μl) 12.5
    HiFi DNA聚合酶(μl) 2
    Forward & Reverse Primers (10 μM)(μl) 0.25
    ddH2O to 25 μl

    表二:PCR循环设定
    温度 94℃ 94℃ 58℃ 72℃ 72℃
    时间 5分钟 45秒 45 秒 1分钟/1kb 5 分钟
    循环 1次 35次 1次

    实验结果分析:

    1. 若直接使用未稀释的DNA模板进行PCR反应,发现没有PCR产物或PCR条带出现弥散等现象,建议首先调整DNA 模板用量。例如,使用ddH2O 或TE Buffer(自备)对裂解得到的DNA 模板进行稀释,比例可为1:1或1:2(DNA 模板:稀释液),然后在25 μl PCR体系中分别加入 5 μl、6 μl、7 μl稀释后的DNA模板作为优化条件。

    2. 设立阳性及阴性对照反应以发现问题所在。阳性反应可用50ng纯化的微生物DNA为模板,阴性反应以ddH2O为模板,引物可采用以前成功扩增的引物。

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