大家都在搜
选用SD雄性大白鼠,体重200g左右。切肾过程应注意无菌操作,尽量减少动物损伤。切口尽可能小,操作尽量快而仔细熟练。实验过程应先切肾后注射STZ,如在注射STZ之后摘除肾脏,易增加动物死亡率。 手术过程:单侧肾切除宜采用背部切口。我们用背部切口方法,背部切口为腹膜外手术,剪开皮肤和肌肉后即暴露肾脏,不触及胃肠,可减少手术损伤,缝合后擦拭伤口,并外用青霉素干粉涂撒伤口,即使在炎热的夏季,成功率亦达 100%。再用0.1mmol/L 枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液,pH 4.2,4℃,将STZ配成 2% 溶液。STZ稳定性较差,应该现配现用。给药途径可以采用静脉注射或腹腔注射。小剂量多次注射STZ诱导糖尿病模型可有效模拟糖尿病的发病,并降低动物模型的死亡率(45mg/kg(冬季)和 35mg/kg(夏季),如有未成模,可再次补给)。 单侧肾切除 STZ 诱导糖尿病肾病小鼠动物模型[44-45](供参考) 雌性C57BL/6J小鼠(20-25g),麻醉后,用6-0号丝线结扎肾动脉、静脉和输尿管后摘除左肾;单侧肾切除后3周,禁食4h后腹腔注射STZ 120mg/dl,10周后所有小鼠禁食6h,取尾静脉血,用全自动血糖分析仪测定血糖浓度。
健康成年 Sprague-Dawley (SD) 大鼠,体重 180-220 g,麻醉后俯卧位固定于手术台上,常规备皮,消毒。在一侧大腿上段后外侧处斜切开皮肤约3.0 cm,用止血钳钝性分离半膜肌及股二头肌,暴露大鼠右后肢坐骨神经。检测复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CMAP),记录正常坐骨神经电生理参数。距坐骨结节6_8咖处用止血钳钳夹神经。根据分组给予相应的钳夹力度,根据文献嗍将压力传感薄膜置于止血钳与坐骨神经之间,根据压力读数控制钳夹力度。每次钳夹时间均持续10s,钳夹范围为钳与坐骨神经接触面积长约0.2 cm。 鉴定方法: 1.坐骨神经电生理检测: 钳夹前及钳夹后30min,分别测量坐骨神经CMAP。采用Synergy 10导肌电图诱发电位仪。刺激时限0.2 ms,刺激强度150mV,带通0.1—100Hz,扫描速度1000ms/D。灵敏度0.1—2.0mV/D。将刺激的同芯针电极放在钳夹的坐骨神经损伤点的远侧端,记录电极插在同一侧腿的腓肠肌肌腹上,地线针电极插在鼠背皮肤上,给予超强刺激后记录一个CMAP及潜伏期Tl;然后在钳夹坐骨神经损伤点的近侧端放置刺激的同芯针电极,记录电极和地线同上,给予超强刺激后记录另一个复合肌肉动作电位CMAP及潜伏期T2。用套管固定坐骨神经近远侧端两刺激铜芯针电极,其间距AS为1.2cm。计算两个刺激电极间的距离AS与两个潜伏期之差的比值,为坐骨神经的神经传导速度(motor nerve conductionvelocity,MNCV),即MNCV=AS/(T2-Tt)。 2.坐骨神经功能指数测定 于术后第2d进行足迹实验。自制大鼠足行走箱,长50cm,宽15cm,受试鼠双足蘸染料,选择爬行过程中留下的4—5个足印,选实验侧(E)及正常侧(N)清晰的足印测量3个变量:①足印长度(print length,PL),即足印的最长距离;②足趾宽度(toe width,TW),即第一趾到第五趾连线距离;③中间足趾距离(inter toedistance,IT),即第二趾到第四趾连线距离。将上述3个变量带人Bain公式计算坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index,SFI),SFI=一38.3(EPL—NPL)/NPL+109.5(ETW—NTW)/NTW+13.3(EIT—NIT)/NIT一8.8。 SFI=0为正常,一100为完全损伤。SFI百分率%=各SD大鼠SFI值/各自钳夹前SFI值×100%t。SFI百分率越大,则损伤越严重。 3.病理检测 待测完大鼠坐骨神经功能指数后,沿原手术路径取其损伤部位神经,长度约lcm,经4%多聚甲醛完全浸泡、固定后,进行各级酒精脱水与透明,随后浸蜡与包埋、切片,做纵切片,片厚约5um。之后再经脱蜡、各级乙醇脱水,最后进行行HE染色,光镜下观察。 [25]1-Acetoxychavicol Acetate Isolated from Alpinia galanga Ameliorates Ovalbumin-Induced Asthma in Mice [26]邝满元, 刘映霞, 李映菊. 肝纤维化动物模型造模方法的研究进展[J]. 现代生物医学进展, 2008, 08(009):1768-1770. [27] Liu Y , Gu X . Establishment and evaluation of cholestatic liver fibrosis model induced by bile duct ligation in SD rat[J]. Chongqing Medicine, 2012. [28]Xiao Y Y . Establishment and evaluation of liver fibrosis model induced by bile duct ligation in mouse[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008. [29] KALU DN .The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss [ J ] .Bone and Mineral, 1991, 15 :175 -192 . [30] F Zhang, Xie J , Wang G , et al. Anti‐osteoporosis activity of Sanguinarine in preosteoblast MC3T3‐E1 cells and an ovariectomized rat model[J]. Journal of Cellular Physiology, 2018. [31]沈薇, 隋璐, 苏禄晖. 实验性骨质疏松症小鼠模型的建立[J]. 沈阳医学院学报, 2006, 8(004):245-246. [32]张月峰, 韩景献. 骨质疏松动物模型研究进展[J]. 动物医学进展, 2005(03):8-11. [33] Wang J , Tang Y , Lv X , et al. Tectoridin inhibits osteoclastogenesis and bone loss in a murine model of ovariectomy-induced osteoporosis - ScienceDirect[J]. Experimental Gerontology, 140. [34] 宋威江. 冠状动脉结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型[C]// 全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会. 中国中西医结合学会活血化瘀专业委员会, 2012. [35] Animal models of myocardial infarction: Mainstay in clinical translation - ScienceDirect[J]. Regulatory Toxicology and Pharmacology, 2016, 76:221-230. [36] Degabriele N M , Griesenbach U , Sato K , et al. Critical appraisal of the mouse model of myocardial infarction.[J]. Experimental Physiology, 2010, 89(4):497-505.497 ~ 505. [37] Oliver Borst,Carmen Ochmann,Tanja Schnberger,et al. 2011. Methods Employed for Induction and Analysis of Experimental Myocardial Infarction in Mice[J]. Cell Physiol Biochem,28( 1) : 1 ~ 12. [38] 李晓群, 高凌志, 张进,等. 高效建立成年小鼠心肌梗死模型[J]. 四川动物, 2012, 31(004):635-638. [39]王晓军, 崔连群, 刘继东,等. 大鼠颈动脉球囊损伤模型的建立 损伤血管的组织学观察[J]. 山东大学学报(医学版), 2005,
[42]朱丽华, 王朗, 陈静,等. 小鼠颈动脉导丝损伤模型建立与特点分析研究[J]. 岭南心血管病杂志, 2012, 18(004):431-435. [43]邢淑丽, 郑君芙, 黄文政. 单侧肾切除STZ诱导糖尿病肾病大鼠动物模型研究[J]. 中国中医急症, 2006, 015(006):643-644. [44] Park K M , Hussein K H , Nam H S , et al. A novel mouse model of diabetes mellitus using unilateral nephrectomy.[J]. Laboratory Animals, 2016:88. [45] Uil M , Scantlebery A , Butter L M , et al. Combining streptozotocin and unilateral nephrectomy is an effective method for inducing experimental diabetic nephropathy in the 'resistant' C57Bl/6J mouse strain[J]. Scientific Reports, 2018, 8(1):5542. [46]王启文, 宋春莉, 沈梅,等. 钳夹压力法建立大鼠坐骨神经损伤模型的研究[J]. 中国康复医学杂志, 2020, 035(002):135-140. [47]Li R, Liu H, Huang H, et al. Chitosan conduit combined with hyaluronic acid prevent sciatic nerve scar in a rat model of peripheral nerve crush injury. Mol Med Rep. 2018;17(3):4360-4368. doi:10.3892/mmr.2018.8388 [48]王婷, 于灏, 胡昕,等. PLGF对大鼠坐骨神经离断模型神经远端恢复的影响[J]. 实用手外科杂志, 2018, 32(04):87-90 [49]Chen J, Zhou XJ, Sun RB. Effect of the combination of high-frequency repetitive magnetic stimulation and neurotropin on injured sciatic nerve regeneration in rats. Neural Regen Res. 2020;15(1):145-151. doi:10.4103/1673-5374.264461 [50]丙泊酚对BALB/c小鼠坐骨神经损伤后相应脊髓节段PSD-95表达的影响 |