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细菌细胞壁很薄,革兰氏阳性菌的细胞壁为20~30nm,革兰氏阴性菌的细胞壁为10~13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖,它与染料结合的能力差,不易着色,在细菌的染色过程中,一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞,细胞壁本身并未染色。 实验方法原理: 根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。 实验材料 :巨大芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 试剂、试剂盒:结晶紫水溶液 单宁酸(鞣酸)水溶液 磷钼酸水溶液 甲基绿水溶液 NaCl 结晶紫水溶液 Bouin氏固定液 硫堇水溶液 乙-醚 仪器、耗材: 乙-醚蒸气瓶 实验步骤: 1. 单宁酸法 (1)将培养16~18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。 (2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。 (3)用0.2%结晶紫染3~5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。 2. 磷钼酸法 (1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3~5分钟。 (2)用1%甲基绿水溶液染3~5分钟。 (3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。 3. 区分细胞壁与细胞质膜 (1)乙醚蒸气法 ①将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上,翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。 ②取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出,水洗。 ③用硫堇染色30秒钟。 ④水洗,水封,置油镜下观察。 (2)NaCl法 ①取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。 ②挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌,在25%NaCl水滴中涂布均匀,待自然干燥。 ③滴加0.01%结晶紫于其上,使盖满有菌部分,30秒钟后水洗,干燥,用油镜观察结果。 |