说起生物医药科研界的让人撕心裂肺的实验,动物实验肯定是其中一大块。裸鼠成瘤,各种疾病造(zuo)模(nie),让我们饱尝与鼠小弟的相爱相杀。 既然有牺牲,除了有尊严,还得有价值。如何让鼠小弟们的牺牲换来的数据逼格更高?自然少不了时下最火爆的动物体内基因转染技术,腺相关病毒(AAV)安全性高、免疫原性低,相对于基因工程小鼠成本低,周期短,风险小,非常适合用于活体动物的基因转导,并且AAV具有多血清型,可以靶向感染不同的组织器官,根据汉恒生物的多年经验汇总了不同组织器官的AAV血清型,注射方式,用量推荐。 汉恒多脏器AAV注射方式及注意点:
注射部位 |
汉恒推荐的血清型 |
注射方式 |
动物 |
注射体积( ul) |
备注 |
心脏 |
AAV9 |
原位多点注射(局部) |
大鼠 |
10-15/点,5 个点 |
心肌主要有系统性给药、 原位给药和冠脉给药法,最常用的是前两种,冠脉法技术难度大,较少用。 **如需提高心肌特异性,您可配合使用汉恒筛选的心肌特异性启动子。 |
小鼠 |
10-15/点,3-5 个点 |
尾静脉注射(系统性) |
大鼠 |
250(200g 体重) |
小鼠 |
100 |
肝脏 |
AAV8 |
尾静脉注射 |
大鼠 |
200(200g 体重) |
大多数病毒都有嗜肝性,因此肝脏也是所有脏器中最好感染的。肝脏也可以用门静脉注射,感染效果更好。 但门静脉注射需行动物手术,技术复杂且易造成创伤。 **如需提高肝脏特异性,您可配合使用汉恒筛选的肝脏特异性启动子。 |
AAV9 |
小鼠 |
100 |
全脑 |
AAV-BBB |
尾静脉注射 |
大鼠 |
250-300 |
特殊血清型,可跨血脑屏障,感染全脑。 但经过汉恒验证,目前该血清型只适合大小鼠,在猴子上不成功。 **如需提高神经细胞特异性,您可配合使用汉恒筛选的神经特异性启动子,如pSyn,pCamKII,pGFAP等。 |
小鼠 |
100 |
大脑(局部) |
AAV9,AAV2,AAV5 |
立体定位注射 |
大鼠 |
1-5ul |
经汉恒验证,AAV9型感染扩散范围广, AAV2次之,AAV5扩散范围最小最集中 **如需提高神经细胞特异性,您可配合使用汉恒筛选的神经特异性启动子,如pSyn,pCamKII,pGFAP等。 |
小鼠 |
0.2-2ul |
脊髓 |
AAV5; AAV1;AAV9 |
鞘内注射 |
大鼠 |
5-10ul |
针头要足够细,找准椎骨之间空隙入针,避免损伤神经。 注射一定要缓慢,且控制好注射体积。 |
小鼠 |
脂肪 |
汉恒脂肪特异性血清型 |
腹内脂肪-腹腔注射 |
大鼠 |
300 |
汉恒实验室自验证的脂肪特异性血清型 |
小鼠 |
150-200 |
皮下脂肪-原位注射 |
大鼠 |
10-15/点,5-8个点 |
小鼠 |
10-15/点,5-8个点 |
骨骼肌 |
9型 |
原位多点注射 |
大鼠 |
10-15/点,3-5个点 |
下针缓慢,注意深度, |
小鼠 |
10-15/点,3-5个点 |
眼睛 |
汉恒AAV视网膜专用型 |
玻璃体腔注射 |
大鼠 |
3~5ul |
汉恒实验室自验证的视网膜特异性血清型 |
小鼠 |
1-2ul |
AAV-DJ |
视网膜下腔注射 |
大鼠 |
3~5ul |
小鼠 |
1-2ul |
肺脏 |
汉恒肺脏特异血清型 |
无创气管注射 |
大鼠 |
100-200ul(200g体重) |
需呼吸机。汉恒也测试过滴鼻法,效果不如气管注射。 |
小鼠 |
50-75 |
肾脏 |
2型或9型 |
肾脏肾盂原位注射 |
小鼠 |
100ul |
较为复杂,方法详见汉恒公众号实验视频 |
肠道 |
1型或5型 |
灌肠 |
大鼠 |
1000ul(200g 体重) |
动物需要提前饥饿,排空肠道。病毒用量非常大。 |
小鼠 |
500ul |
血管 (内皮为主) |
1型或5型 |
腹主动脉局部感染 |
大鼠 |
50ul |
局部感染30分钟,感染时需要clamped肾主动脉 |
除了不同的血清型靶向感染动物组织外,汉恒生物还研发了特异性启动子和特异性血清型,可实现动物活体的基因精准定向递送。
in vivo基因转导的工具小恒帮您搞定了,然而多脏器注射对操作的要求高,稍有不慎,鼠弟归天数据报销。不过贴心的小恒已经准备了史上最全的动物实验注射视频,为您的动物实验保驾护航! 想要查看全部注射视频,请至汉恒公众号-微官网-实验视频。 不单单是AAV,其他的drug,particle的注射方式也如出一撤,只要你需要做到动物实验,汉恒动物实验视频一定会对你有所帮助。建议大家关注汉恒公众号,随时查看汉恒实验视频。 |