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很多课题组在发表文章的如果使用的是shRNA敲低的方式,有时候就需要被问到是否有“基因敲除”的数据支持,所以有时就得回来再做两个细胞株看看表型是否一致,而一般为什么需要选择两个细胞株的原因就是为了更好的观察表型的一致性,避免数据的偏差。 这个时候最着急的就是如何快速的完成实验,缩短周期了? 缩短细胞敲除的周期大概可以包括下面几个方式: 1、选择具备完善技术服务体系数据支撑的工作来协助; 一般看一家工作做的案例数量,还有就是技术支持是否对问题的认知足够深入,这些将是非常有力的支撑,可以帮助到课题的从设计到实施的整个过程中的效率。其中最为重要的就是课题的把握:是否对这个基因分析和功能有足够明确的认识。 2、选择具备良好基因编辑特性的细胞做实验,选好细胞株; 不同的细胞株增殖速度差异很大,有的可以快速的增殖,有的需要特殊的培养基,有点需要有独特的培养表面,所以选择一个具有代表性又容易培养的细胞是很重要的事情,我们一般建议是先参考文献列出3-5种,再对比那种细胞容易培养,容易获得再做出最后的选择。Cas9X™自有细胞库,可以涵盖大部分的细胞系,可以全力支持科研的需求。同时我们与ATCC中国区代理机构和中科院细胞库建有良好的商业合作,可以在1-2周内完成大部分细胞调取的工作。 3、加大服务的细胞容量,一次性拿到更多的细胞克隆; 服务细胞容量,就是电转或者感染更多细胞,这样的好处就是细胞在拿到的时候有更多的被编辑好的细胞株,可以更好的扩增起来具有更多基因型细胞。这样为后面的单克隆检测能够拿到更多的细胞打下基础。 Cas9X™为加速的客户提供了2X的技术服务选择,可以在细胞电转和克隆挑选关键环节做到2X的数量,这样可以在更高概率让客户一次性拿到想要的阳性克隆。 4、可以多筛选几组gRNA选到更好的切割活力的序列; 我们在做切割之前,都需要对所有的gRNA进行一次初步的验证筛选,筛选到合适的序列之后再用于大量的实验;这个好处就是保证了实验的一次性成功率。我们建议可以筛选更多的gRNA序列,来保证一次通过实验拿到阳性克隆。 5、使用快速的检测方式; Cas9X™一直都在使用PCR-Direct的办法,使得整个实验的周期更加可靠可控。 6、选择更加稳妥的敲除策略; Cas9X™我们一直都是选择做大片段敲除来做项目敲除,一个是容易鉴定,一个是WB更有保证,再有gRNA切割的位点都在内含子上,更有保障。 当然我们也可以提供更加便宜的移码敲除方式供您选择。除此之外我们的MixClone™技术仅需9980元,保证能够有50%以上的细胞基因敲除。 |