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        B细胞V区突变检测

        相关实验:用循环测序法检测突变实验

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        免疫小万

        给小鼠免疫后分出GC细胞进行V区突变检测,有谁做过能联系我一下给我发下步骤什么的吗

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        3 个回答

        user-title

        dxy_54fklm8q

        有帮助

        你好,我想请问一下,你是用什么抗体分出GC B细胞的呀,我用CD19和CD27未分出双阳性区域,同时用igm和igg分igg阳性和igm阴性区也没分出来,只分到双阳区域。

        user-title

        免疫小万user-title

        B220+PNA+

        user-title

        dxy_54fklm8q

        好的谢谢!请问一下你有做过记忆b细胞的分型吗,我想分选cd19和cd27双阳区域,但分不出来只有单阳区域,看文献也能分出双阳,不知道什么原因,如果做过的话求解答,没做过就打扰了😂

        user-title

        dxy_mqg1dtg8

        有帮助

        进行V区突变检测的主要方法是单细胞PCR和测序。下面是一般的实验步骤:

        1. 将小鼠免疫,并在免疫后收集其脾脏细胞。将脾脏细胞进行单细胞悬浮,分离出GC B细胞。

        2. 从单个GC B细胞中,通过PCR扩增出其Ig基因的V区片段,包括V、D、J区域。

        3. 将PCR产物进行测序,得到Ig基因V区的序列信息。

        4. 将测序得到的Ig基因V区序列与未经免疫处理的小鼠Ig基因V区进行比对,以确定是否发生了突变。

        5. 如果发现突变,则将突变频率计算出来,并进一步分析其对蛋白质功能的影响。

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        loveliufudan

        有帮助

        首先,您需要收集小鼠的脾脏或淋巴结样本,然后进行单细胞分离和排序,以获得单个免疫球蛋白基因重组细胞(GC细胞)。接下来,您可以使用PCR或测序技术来分析V区的突变。这涉及到从GC细胞中提取DNA、扩增V区的DNA片段,并使用测序方法来确定突变的位置和类型。最后,您可以进行数据分析以解读突变结果。

        user-title

        免疫小万user-title

        你好 我想问下需做几代测序检测

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