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        在养兔原代脂肪细胞,但是要么就是消化不下来,要么就是消化下来全是碎片,传代以后细胞形态也越来越差,怎么办?

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        巴啦啦能量-wy


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        5 个回答

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        huarenqiang5

        有帮助

        建议你用含EDTA的胰酶,消化前用pbs冲洗细胞,也可直接用胰酶冲洗。加消化液后置培养箱。消化一段时间后仍然贴壁很稳的话可以重复上面的操作。

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        sswei

        有帮助

        可能消化过度,建议消化处理时,在细胞将脱落而未脱落时弃去胰酶,然后加入新鲜培养基将细胞轻轻吹下来,再分到皿里

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        loveliufudan

        有帮助

        有几种可能的解决方案:

        1. 培养基优化:尝试使用不同的培养基和培养条件,以找到最适合兔原代脂肪细胞生长和增殖的条件。不同的细胞类型可能对培养条件有不同的要求,因此通过尝试不同的培养基成分、添加物和pH值等因素来优化培养条件。

        2. 传代技术改进:传代过程中细胞形态的恶化可能与细胞的老化或过度传代有关。尝试调整传代的时间和方法,以避免过度传代和老化。适当控制细胞的分裂次数,确保在细胞形态开始恶化之前进行传代。

        3. 细胞减数分裂检测:检测您的细胞在培养过程中是否发生了减数分裂,即细胞染色体的异常分离和结构异常。这可能会导致细胞形态的恶化和碎片化。如果发现减数分裂的问题,可能需要重新评估您的细胞源或培养条件。

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        于小鱼鱼1998

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        考虑是消化时间掌握的不对,如果细胞密度大的话要加长消化时间,密度小应该减少时间

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        尚瑨医生

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        根据你说的,并不是因为细胞有过度融合而消化不下来。细胞既然回缩,不再连成片,就表明细胞已经开始受到胰酶的影响,消化正在逐渐进行。


        因为细胞本身的原因,它贴壁比较牢固,所以造成细胞难于消化,遇到这种情况,你大可以延长消化时间,你最好摸索一个最佳时间,对于难消化额细胞消化个半小时甚至到一小时是没有问题的,当然这是对于难消化细胞,贴壁异常牢固的细胞而言。


        其次,建议你在进行消化时 首先把细胞培养瓶中的液体吸干净,然后吸入适量的胰酶,进行消化前的润洗,润洗后吸走,再加入消化量的胰酶进行消化,消化不下来的话可以延长消化时间。你需要摸索控制好时间。如果细胞成片被消化脱落的话,需要你进行吹打以吹散,必要时离心。


        对于贴壁牢固的细胞,在玻璃瓶中传代培养会相对好消化一点,但是容易连成片,所以再你正式实验的前一次传代需要转回到塑料瓶里,消化下来的细胞都比较会是一个个的。

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