请问各位悬浮细胞给药5-7天后测cck8该怎么操作呢？

1.接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。3.将培养板置于培养箱中预培养（37℃，5% CO2）12-24小时，使细胞达到指数期（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异）。

每孔加入10ul CCK-8试剂

①由于每孔加入CCK-8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议直接配置含10% CCK-8培养基（现用现配）以换液的形式加入。注意加CCK-8试剂时不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数。加CCK-8试剂时速度要快，减少试剂在移液器上的残留，加入CCK-8试剂后轻轻震培养板。

②加CCK-8试剂时间可分别在22h、46h、70h、94h时加入，也可以在24h、48h、72h、96h时再加入。重要的是需保证实验组和对照组在同一时间点进行实验。

③若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8。5.将培养板置于培养箱内继续培养0.5-4小时①

对于悬浮细胞在加入CCK-8培养1-4小时后,可先从培养箱中取出,目测染色程度或用酶标仪测定决定。若显色困难,可将培养板放回培养箱,继续培养数小时后再确定;

加CCK-8试剂时，斜贴着培养壁加，不要插到培养基液面下，容易产生气泡，会干扰O.D值读数;

为使CCK-8试剂和培养基充分混匀,建议在加入CCK-8试剂后轻轻振摇培养板。为了避免加样时由于CCK-8试剂在枪头上的残留所带来的误差,可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样;

如果待测物质有还原性，就会和CCK-8试剂发生显示反应，增加吸光度，如果药物有氧化性则降低吸光度。请检查背景的OD值，即在不含细胞的培养基中加入药物,然后加入CCK-8试剂在一定时间内检测,和不加药物的培养基进行比较(只加CCK-8试剂),如果OD值明显偏高,则说明有反应，也可以在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物影响。

加入待测物质的浓度需要多参考文献，选择合适的浓度梯度进行筛选。

尽量使用多通道移液器，可以减少平行孔间差异。

如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以设定600nm作为参比波长，扣除参比波长的OD值。

1.取10ul CCK-8溶液加入96孔细胞培养板，在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。

2.测定吸光度。建议采用双波长进行测定，检测波长430-490nm，参比波长600-650nm，或者采用450nm单波长检测。