细胞实验问题求助？？

可能是pi染色时间太长出现的假阳性，建议减小pi浓度或减少pi染色时间。

可能有以下几个原因：

1. 细胞状态：FDA和PI都是常用的细胞活力染料，但它们的工作原理不同。FDA能够进入活跃的细胞并被细胞内酯酶水解，生成具有绿色荧光的荧光素。而PI主要用于染色已经损伤或死亡的细胞，它能够穿透细胞膜并与细胞核内的DNA结合，发出红色荧光。因此，如果在FDA/PI染色过程中，某些细胞同时存在活跃的细胞和已经受损或死亡的细胞，这些细胞可能会同时显示绿色和红色荧光。

2. 染色条件和时间：染色条件和时间的不同也可能导致细胞同时显示绿色和红色荧光。如果FDA和PI的染色时间过短或浓度过低，可能导致染色的不充分，使得细胞同时显示两种荧光信号。

3. 染色剂交叉作用：尽管FDA和PI通常用于分别染色活跃细胞和已经死亡的细胞，但有时这两种染色剂可能会发生交叉作用。染色剂之间的相互作用可能导致细胞同时显示绿色和红色荧光。

为了更准确地评估细胞的活力和状态，建议尝试使用单独的荧光染料对HUVEC细胞进行染色，例如只使用FDA进行活细胞染色或只使用PI进行死细胞染色，以区分细胞的不同状态。另外，确保在染色过程中遵循正确的染色方案和操作步骤，以获得准确的染色结果。

考虑是存在自发荧光，建议可以先封闭一下